生物选修一大肠杆菌的培养和分离.pptVIP

液体培养基： 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 按物理状态来分 用途：工业生产、扩大培养 固体培养基：菌落，菌苔 按物理状态来分 用途：菌种分离、鉴定、计数 保存菌种 半固体培养基： 无动力 有动力(弥散) 观察细菌的运动、厌氧菌的分离和菌种鉴定 按物理状态来分 1．液体基础培养基 牛肉膏0.3g，蛋白胨1g，氯化钠0.5g ，蒸馏水100ml，加热溶解以上成分，冷至40-50℃，调pH值至7.4~7.6，煮沸3-5分钟，补足水分，过滤、分装、高压灭菌。 2．半固体基础培养基 在液体基础培养基100ml中加琼脂0.2-0.5g，加热至100℃使琼脂熔化，分装试管，高压灭菌。取出后直立放置至琼脂凝固。 3．固体基础培养基 在液体基础培养基100ml中加琼脂2-3g，加热至100℃使琼脂化，分装于试管和三角烧瓶中，高压灭菌。取出后趁热将试管倾斜一定角度放置，琼脂凝固后即成普通琼脂斜面；将三角烧瓶中培养基倾注于灭菌平皿内，凝固后即成琼脂平板基础培养基。 选择培养基 加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物 加入青霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞 按功能来分 ——添加或缺少某种化学成分用于菌种的分离 鉴别培养基 按功能来分 当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌 添加某种指示剂后化学药剂用于菌种的鉴别 伊红—美蓝鉴别大肠杆菌 大肠杆菌菌落 伊红美蓝培养基 天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好 缺点：来源受限;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染; 天然培养基： 按化学成分来分 根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。 合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。 优点：标准化生产，组分和含量相对固定;成本低 缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 合成培养基: 按化学成分来分 血清中含有： ①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） ②多种金属离子； ③激素； ④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。 ⑤各种生长因子 ⑥转移蛋白 ⑦不明成分 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。 按化学成分来分 不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐、生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH 、氧气、渗透压的要求． 细菌喜荤，霉菌喜素 大肠杆菌配方：酵母提取物：0.5g 蛋白胨：0.5g Nacl：0.5g 琼脂?： 1g 水:50ml 细菌喜中性偏碱，霉菌喜中性偏酸 LB固体培养基 大肠杆菌菌液（LB液体培养基） 大肠杆菌培养基：一般用LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌，培养后可在LB固体培养基上划线分离。 大肠杆菌的扩大培养 好氧型 将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中,使其在37℃摇床培养12小时。 注意事项: 1.火焰旁从斜面上用接种环取菌; 2.取菌前接种环要用酒精灯灼烧 灭菌,冷却后方能取菌; 3.取菌后封口膜和棉塞复原. 二、无菌技术 从制备培养基到接种与培养等全部实验过程要无菌操作 （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒 ； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌 ； （3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。 获得纯净培养物的关键: 消毒与灭菌 (1)消毒： 概念：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。包括芽孢和孢子吗？ 不包括 防止外来杂菌的入侵 1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min（日常生活常用） 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min