PCR实验室操作流程图.docVIP

. . word版本 乙型肝炎病毒(HBV DNA PCR ABI7300)检侧标准操作程序 一、INFORMATIONFORTEST检测信息 项目名称 乙型肝炎病毒核酸 方法 聚合酶链反应 方法依据 卫生部《全国临床检验操作规程》第三版（2006）第七篇第六章第一节 二、ANALYTICALPRINCTPLE检测原理 聚台酶链式反应(PCR〕可对特定核苷酸片段进行指数级的扩增，而实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在实时荧光定量PCR反应中，引入了一种荧光化学物质，荧光物质有两种：荧光探针和荧光染料。我们目前是使用TaqMan荧光探针的检测原理：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’一3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，荧光信号强度也等比例增加（图一）。这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得