常规真核表达与鉴定.pptVIP

常规真核表达与鉴定;一、真核表达概述； 二、常用真核表达系统； 三、细胞与载体的选择； 四、哺乳动物细胞转染； 五、Western-blot法对转染结果的检测； 六、间接免疫荧光法（IFA）对转染结果的检测； 七、Cell-ELISA法对转染结果的检测；;一、真核表达概述;二、常用真核表达系统;4、杆状病毒昆虫细胞表达体系：蛋白表达水平高，可长晶体，多用于蛋白结果与功能的研究，但重组质粒构建及融合十分复杂。;三、细胞与载体的选择;四、哺乳动物细胞转染; 细胞转染步骤 ——以DFV-E基因转染cos-7细胞为例;3、将第二步中（2）加入（1）中，混匀，不要剧烈吹打，孵育20min（在两者作用的20min时间内，洗涤细胞） 4、细胞的洗涤：先弃掉原培养液，以维持液DMEM（未加血清）洗涤两遍1mL/孔；再用OPTI-MEM洗涤一遍，约1mL/孔。细胞洗涤也可用预热的PBS或者Hanks液洗涤，最后一遍洗涤最好使用维持液。 5、将六孔板中的以上液体弃掉，再加入1.5mL的OPTI-DMEM； 将孵育的脂质体及质粒（500uL/孔）均匀 滴入其中，轻摇六孔板使之混合均匀。;6、将六孔板放入培养箱，一般5～6小时后换液，具体是否要换液根据细胞具体生长状态进行调整。 7、弃去原培养液，补加2mL/孔的OPTI-MEM，或者加入