DNA片段分离回收常用方法.pptVIP

实验五 琼脂糖凝胶中DNA片段的分离和回收 玻璃奶法分离回收琼脂糖凝胶中DNA片段 质粒DNA的连接和转化 第一部分 琼脂糖凝胶中DNA片段的分离和回收 ——玻璃奶法分离回收琼脂糖凝胶 中DNA片段 实验目的： 掌握利用玻璃奶法从琼脂糖凝胶中分离回收DNA片段的原理和操作技术; 了解其他几种方法的原理与操作技术。 DNA片段分离回收常用方法： 电洗脱法 低熔点琼脂糖凝胶法 DEAE滤膜插片法 玻璃奶法 电洗脱法 将含DNA片断的凝胶放在一个用半透膜隔离的空间中，通过电泳的电流使得DNA离开凝胶进入液相。 回收液相后纯化沉淀其中的DNA分子。 低熔点琼脂糖凝胶法 将切好的回收胶块放在回收胶槽内，在切去胶块处加入低熔点琼脂糖胶，待其凝固后将其小心放回电泳槽继续进行电泳。 待目的带完全进入低熔点琼脂糖胶后，在长波紫外灯下切下含有所需DNA带的凝胶条，置于新的EP管中，加300 μL TE。 65℃水浴10 min或更长使胶块完全融化。 酚氯仿抽提DNA，乙醇沉淀。 DEAE滤膜插片法 将DEAE纤维素膜裁成小条活化处理。 电泳后在目的条带前切一刀，将比条带略宽的DEAE纤维素膜插入切口，不留气泡，继续电泳一会儿，条带上的DNA被膜片截留。 取出膜片冲洗后转移到离心管中加缓冲液65度保温洗脱，直到膜上没有DNA了，将溶液用酚氯仿抽提沉淀。 这个方法不适合