液相色谱-质谱联用技术简介-中国科学院烟台海岸带研究所.pptxVIP

液相色谱-质谱联用技术及使用注意事项 中国科学院烟台海岸带研究所 分析测试中心 刘莺 主要内容 液相色谱-质谱联用技术简介 我们的仪器 测试准备阶段的注意事项 结果的解读 质谱基本原理 质谱分析法是通过对被测样品离子质荷比的测定来进行分析的一种分析方法。 电离装置把样品电离为离子 质量分析器把不同质荷比的离子分开 检测器检测 第一章 液相色谱-质谱联用技术简介 色谱-质谱联用技术 体现了色谱和质谱优势的互补，它将色谱对复杂样品的高分离能力与质谱的高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点结合起来，实现对复杂混合物更准确的定量和定性分析。 气相色谱-质谱联用技术(GC-MS) 液相色谱-质谱联用技术(LC-MS) 以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。样品在质谱部分和流动相分离，被离子化后，经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱图。 第一章 LC-MS技术简介 液相色谱-质谱联用仪 LC-MS, LC-ITMS, LC-TOF, LC-QqQ, LC-Q-TOF, LC-IT-TOF, LC-Q-IT等 适用于不挥发性化合物、极性化合物、热不稳定化合物、大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析测定 第一章 LC-MS技术简介 液相色谱-质谱联用仪 LC 离子源 离子传输系统 质量分析器 检测器 数据系统 真空系统 大气 第一章 LC-MS技术简介 与质谱联用的液相色谱 液相色谱柱 规格：50×2.1mm、100×2.1mm、150×2.1mm、 150×4.6mm， 250×4.6mm 填料粒径：亚二微米（1.7-1.9m）、2.5 m 、3m、 3.5m、 5m 填料类型：C18、C8、-NH2、-CN等 第一章 LC-MS技术简介 与质谱联用的液相色谱 流动相 溶剂 推荐使用水、甲醇、乙腈、异丙醇 不能使用四氢呋喃、二氯甲烷、正己烷、氯仿 酸 不能使用无机酸(可能会导致腐蚀) 推荐使用醋酸和甲酸 三氟乙酸（TFA）会产生离子抑制作用 第一章 LC-MS技术简介 与质谱联用的液相色谱 流动相 碱 不要使用碱金属碱(可能会导致腐蚀) 推荐使用氨水 三乙胺/三甲胺（TEA/TMA）有助于形成负离子 表面活性剂 清洁剂和其他表面活性剂会产生离子抑制 缓冲盐 避免使用非挥发性盐，特别是碱金属磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐等。 推荐使用甲酸铵、乙酸铵 第一章 LC-MS技术简介 不能使用 与质谱联用的液相色谱 流动相的流速 样品分离的需要 柱子内径 离子源类型 第一章 LC-MS技术简介 Column ID Flow Rate 4.6 mm 1.0 mL/min 3.0 mm 0.5 mL/min 2.1 mm 0.2 mL/min 1.0 mm 50 L/min Capillary 10 L/min 液相色谱-质谱联用仪 LC 离子源 离子传输系统 质量分析器 检测器 数据系统 真空系统 大气 第一章 LC-MS技术简介 液质联用仪的离子源 离子源的作用 去溶剂 离子化 真空过渡 去除干扰 大气压电离源（Atmosphere pressure ionization，API） 电喷雾电离源（Electrospray ionization，ESI） 大气压化学电离源（Atmosphere pressure chemicel ionization，APCI） 第一章 LC-MS技术简介 液相色谱与质谱的接口 液质联用仪的离子源 正离子模式：ESI(+)或APCI(+) 适合于碱性样品，可用乙酸或甲酸对样品加以酸化。样品中含有仲氨或叔氨时可优先考虑使用正离子模式。 负离子模式：ESI(-)或APCI(-) 适合于酸性样品，可用氨水或三乙胺对样品进行碱化。样品中含有较多的强负电性基团，如含氯、含溴和多个羟基时可尝试使用负离子模式。 第一章 LC-MS技术简介 离子源与液相色谱的流速 ESI 1 μL/min - 1mL/min 最佳使用流速: 200 μL/min 一般来说, 高流速需要高的毛细管温度和鞘气、辅助气流量。 APCI 200 μL/min - 2mL/min 最佳使用流速: 500 μL/min 一般来说，高流速需要更高的鞘气和辅助气流量，但不需要提高毛细管温度 第一章 LC-MS技术简介 高流速需进行分流 电喷雾电离源(ESI) 第一章 LC-MS技术简介 电喷雾电离源(ESI) 第一章 LC-MS技术简介 大气压化学电离源(APCI) 第一章 LC-MS技术简介 液质联用仪的离子源 ESI 离子在液态产生 有益于热不稳定化合物的分析 有益于中等到高极性化合物的分析 有益于大分子（蛋白/多肽）的分析 APCI 离子在