基因工程的原理和技术74645.ppt

重组质粒 大肠杆菌的拟核 目的基因 氨苄青霉素抗性基因（标记基因） 将细菌用CaCl2处理，使细胞处于感受态，可促进细胞吸收DNA分子 （3）如果是导入微生物（如细菌） 感受态：细胞处于容易吸收外源性DNA的状态。 处于感受态的细胞称为感受态细胞. CaCl2 0℃ 重组载体 感受态细胞 42℃ 抗氨苄青霉素基因 α点为目的基因与 质粒A的结合点 四环素抗性基因 目前把重组质粒导入细菌细胞时，效率还不高，导入完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒，有的导入的是普通质粒A，只有少数导入的是重组质粒。 4.筛选含有目的基因的受体细胞 目的基因是否导入受体生物中需要有筛选标记： －－－如以质粒做为载体可进行抗性的检测 原理：质粒上有抗生素的抗性基因 方法：利用选择培养基筛选 思考：通常为什么要选用含有两个标记基因的运载体？ THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 没有质粒 含目的基因的质粒 正常质粒 没有质粒 含目的基因的质粒 正常质粒 ①检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因（关键） ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质（表达） （2）常用的技术： ①DNA分子杂交技术 ②蛋白质分子（抗原－抗体）间的杂交 5. 目的基因的表达 （1）内容： （2）基因工程的的原理及技术 分子水平：DNA分子杂交技术 核心－－DNA探针 目的基因的脱氧核苷酸（单链）序列片段 用荧光分子或放射性同位素标记 看能否形成杂合的双链区 检测— 鉴定—— ①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定等 过程:A.首先取出转基因生物的基因组DNA B.用含目的基因的DNA片段( 单链)用放射性同位素等作标记, 以此做探针 C.使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带, 表明目的基因已插入染色体DNA中 方法: DNA分子杂交 方法: 分 子 杂 交 方法: 抗原抗体杂交 过程:用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂 交带,表明目的基因转录出了mRNA. 目的基因与质粒的连接 基因DNA文库的构建 将总DNA经过酶解，分离不同长短的DNA片段。包含的基因片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上，感染细菌或体外包装到噬菌体颗粒上便构成了该生物的基因文库。 基因探针： 基因探针就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列。它包括整个基因，或基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。 DNA分子杂交示意图 采用一定的技术手段，将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。 基因探针（DNA探针）与目的基因杂交，有无杂交带 传统的遗传育种方法有哪些？ 传统的遗传育种方法能否解决不同种生物优良性状的重组问题？ 基因工程技术如何解决不同种生物优良性状的重组问题？ 基因工程的应用 基因工程的应用 一、基因工程与作物育种 二、基因工程与疾病治疗 （１）基因工程药物 （2）基因诊断 （3）基因治疗 三、 基因工程与环境保护 基因工程的应用 一、基因工程与作物育种 1.抗虫转基因植物 2.抗病转基因植物 3.其他抗逆转基因植物 （如抗盐、抗旱、抗除草剂植物等） 4.利用转基因改良植物的品质 基因工程在农业上的应用： 1）高产、稳产和具优良品质的品种 2）抗逆性品种 基因工程在畜牧养殖业上的应用: 基因工程与疾病治疗 基因工程药品的生产 在传统的药品生产中，某些药品如胰岛素、干扰素直接生物体的哪些结构中提取？ 药品直接从生物的组织、细胞或血液中提取。 传统生产方法的缺点 由于受原料来源的限制，价格十分昂贵。 可利用什么方法来解决上述问题？ 利用基因工程方法制造“工程菌”，可高效率地生产出各种高质量、低成本的药品。 基因工程胰岛素 胰岛素是治疗糖尿病的特效药，长期以来只能依靠从猪、牛等动物的胰腺中提取，100Kg胰腺只能提取4-5g的胰岛素，其产量之低和价格之高可想而知。 胰岛素分子结构 基因工程胰岛素 将合成的胰岛素基因导入大肠杆菌，每2000L培养液就能产生100g胰岛素！大规模工业化生产不但解决了这种比黄金还贵的药品产量问题，还使其价格降低了30%-50%! 胰岛素生产车间 基因工程干扰素 干扰素治疗病毒感染简直是“万能灵药”！过去从人血中提取，300L血才提取1mg！其“珍贵”程度自不用多说。 干扰素生产车间 干扰素分子结构 SCID的基因工程治疗 重症联合免疫缺陷（SCID）患者缺乏正常