人生长激素释放多肽GHRPGHRELIN酶联免疫检测说明书.docVIP

人生长激素释放多肽GHRPGHRELIN酶联免疫检测说明书.doc

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人生长激素释放多肽(GHRP-GHRELIN)酶联免疫检测 试剂盒使用说明书 使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于生物素双抗体夹心技术原理,来检测人生长激素释放多肽(GHRP-GHRELIN)),只能用于研究用途,不得用于医学诊断。 用途:用于人血清、血浆及相关液体样本中生长激素释放多肽(GHRP-GHRELIN)的测定。 工作原理 本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(GHRP-GHRELINLISA)测定样品中人生长激素释放多肽(GHRP-GHRELIN)的水平。向预先包被了人生长激素释放多肽(GHRP-GHRELIN)单克隆抗体的酶标孔中加入生长激素释放多肽(GHRP-GHRELIN),温育;温育后,加入生物素标记的抗GHRP-GHRELIN抗体,再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人生长激素释放多肽(GHRP-GHRELIN)的浓度呈正相关。 试剂盒组成 1 标准品(9600pg/ml) 0.5ml 7 显色剂A液 6ml 2 标准品稀释液 3ml 8 显色剂B液 6ml 3 酶标包被板 12孔×8条 9 终止液 6ml 4 链霉亲和素-HRP 6ml 10 说明书 1份 5 30倍浓缩洗涤液 20ml 11 封板膜 2张 6 生物素标记的抗-GHRP-GHRELIN抗体 1ml 12 密封袋 1个 需要而未提供的试剂和器材 37℃恒温箱。 标准规格酶标仪。 精密移液器及一次性吸头 蒸馏水, 一次性试管 吸水纸 注意事项 从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。 洗板方法 手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。 自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 标本要求 1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 操作程序 标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释): 4800pg/ml (5号标准品) 120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液 2400pg/ml (4号标准品) 120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液 1200pg/ml (3号标准品) 120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液 600pg/ml (2号标准品) 120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液 300pg/ml (1号标准品) 120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。 加样:1)空白孔:空白对照孔不加样品,生物素标记的抗GHRP-GHRELIN抗体,链霉亲和素-HRP,只加显色剂AB和终止液,其余各步操作相同;2)标准品孔:加入标准品50μl,链霉素-HRP50μl(标准品中已事先整合好生物素抗体,故不加);3)待测样品孔:加入样本40μl,然后各加入抗- GHRP-GHRELIN抗体10μl、链酶亲和素-HRP50μl,盖上封板膜,轻轻振荡混匀,37℃温育60分钟。 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸亮度(OD值)。测定应在加终止液后10分钟以内进行。 9.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。 操作程序总结: 准备试剂,样品和标准品 加入准备好的样品和标准品,生物素标记二抗和酶标试剂,37℃反应60分钟

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