基因工程的原理和技术71257.ppt

4.筛选含有目的基因的受体细胞 目的基因是否导入受体生物中需要有筛选标记： －－－如以质粒做为载体可进行抗性的检测 原理：质粒上有抗生素的抗性基因 方法：利用选择培养基筛选 ①检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因（关键） ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质（表达） （2）常用的技术： ①DNA分子杂交技术 ②蛋白质分子（抗原－抗体）间的杂交 5. 目的基因的表达 （1）内容： （2）基因工程的的原理及技术 分子水平：DNA分子杂交技术 核心－－DNA探针 目的基因的脱氧核苷酸（单链）序列片段 用荧光分子或放射性同位素标记 看能否形成杂合的双链区 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 检测— 鉴定—— ①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定等 过程:A.首先取出转基因生物的基因组DNA B.用含目的基因的DNA片段( 单链)用放射性同位素等作标记, 以此做探针 C.使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带, 表明目的基因已插入染色体DNA中 方法: DNA分子杂交 方法: 分 子 杂 交 方法: 抗原抗体杂交 过程:用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂 交带,表明目的基因转录出了mRNA. 基因工程的基本操作程序 目的基因的获取 形成重组DNA分子 将目的基因导入受体细胞 筛选含有目的基因的受体细胞和目的基因表达 1、从基因文库中获取目的基因 2、利用PCR技术扩增目的基因 3、化学方法人工合成 农杆菌转化法、显微注射法、Ca2+处理法 DNA分子杂交技术、抗原—抗体杂交技术 分子检测外的个体水平鉴定 本节小结： 1. 用基因工程技术可使大肠杆菌合成人的蛋白质。下列叙述不正确的是 A.常用相同的限制性内切酶处理目的基因和质粒 B.DNA连接酶和 RNA聚合酶是构建重组质粒必需的工具酶 C.可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒 D.导入大肠杆菌的目的基因不一定能成功表达 B 巩固练习 2下列属于获取目的基因的方法的是( ) ①利用mRNA反转录形成 ②从基因文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录 ⑥人工合成 A．①②③⑤ B．①②⑤⑥ C．①②③④ D．①②④⑥ D 3.基因工程又叫基因拼接技术。 (1)在该技术中，用人工合成方法获得目的基因的途径之一是：以目的基因转录的 为模板， 成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成 。 (2)基因工程中常用的受体细胞有细菌、真菌、 。 (3)假设以大肠杆菌质粒作为载体，并以同一种限制性内切酶切割载体与目的基因，将切割后的载体与目的基因片段混合，并加入DNA连接酶。连接产物至少有 种环状DNA分子，它们分别 是 。 信使RNA 逆转录 双链DNA(目的基因) 动植物细胞 3 载体自连的、目的基因片段自连的、 载体与目的基因片段相连的环状DNA分子 目的基因与质粒的连接 基因DNA文库的构建 将总DNA经过酶解，分离不同长短的DNA片段。包含的基因片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上，感染细菌或体外包装到噬菌体颗粒上便构成了该生物的基因文库。 基因探针： 基因探针就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列。它包括整个基因，或基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。 DNA分子杂交示意图 采用一定的技术手段，将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。 基因探针（DNA探针）与目的基因杂交，有无杂交带 传统的遗传育种方法有哪些？ 传统的遗传育种方法能否解决不同种生物优良性状的重组问题？ 基因工程技术如何解决不同种生物优良性状的重组问题？ 第一章 第三节 基因工程的应用 基因工程的应用 一、基因工程与作物育种 二、基因工程与疾病治疗 （１）基因工程药物 （2）基因诊断 （3）基因治疗 三、 基因工程与环境保护 基因工程的应用 一、基因工程与作物育种 1.抗虫转基因植物 2.抗病转基因植物 3.其他抗逆转基因植物 （如抗盐、抗