河南科技大学大学生研究训练计划(SRTP)项目申请书《RNAi诱导tap mRNA降解对果蝇神经发育的影响》.pptVIP

实验步骤 1）取6只麻醉的果蝇（让乙醚挥发干净）放入1.5ml离心管中，加入消化缓冲液30μl，用200μl Tip枪头迅速捣碎。 2）补加消化缓冲液400μl，混匀，置65℃温浴30分钟每10分钟摇荡一次，以使样品被充分消化。 3）取出离心管加入400μl酚，400μl氯仿：异戊醇（24：1）的混合物，盖紧管盖，上下颠倒充分混匀，抽提样品5ml,12000rpm离心5分钟。 4）小心吸取上清转移至新的离心管中。加入400μl异丙醇，轻轻混匀3min，此时可见白色线团状物质出现。 5）14000rpm离心10分钟，让线团状物质沉到管底或管壁，小心倒出液体。 6）用400μl 75％的乙醇洗涤沉淀，12000rpm离心5min,倒掉乙醇，倒置晾干至乙醇味道消失，沉淀用50μl TE 缓冲液溶解。（此时得到的白色线状物即为DNA. 7)取完全溶解后的DNA原液进行1:100稀释，即1μl原液 + 99μl水，混匀。 取完全溶解后的DNA原液进行1:100稀释， 即1μl原液 + 99μl水，混匀。 紫外分光光度计检测： A260 = ? A280 = ? DNA纯度鉴定 A260 / A280 ＜ 1.6