大鼠灌注固定取脑,解剖取材精编PPT课件.pptxVIP

大鼠灌注固定取脑 主讲：陈爽 2017.9.12用途1.用于常规HE染色，免疫组化分析。2.冰冻切片可以不做脑组织固定。3.不可用于western blot和PCR。4.如果观察脑组织的缺血、损伤或其它病变时，不作灌注 固定，而是在取出脑组织后作固定，将大大影响效果。原理 心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死 亡前进行组织的前固定,避免了组织的自溶 现象,是脑组织切片观察的常用方法。多聚 甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的 原位和表面结构不变，从而能使其对应的抗体，准确检测其表达的位置和量。 必要性1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供 也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。3.脑内血液都在，HE染色后，可去除红细胞背景影响流程麻醉 开胸 心尖向左心室穿针 剪开右心耳 生理盐水冲洗 4%多基甲醛固定 取脑 保存或切片. 具体过程 大鼠经深度麻醉后，固定于自制的手术木板置于解剖盘中,开胸暴露并游离出心脏,经左心室插入灌流针并固定, 切开右心耳,先灌注冰冻无菌生理盐水(4℃)XmL，直到肝和肺脏颜色转白及右心房流出液澄清,后再灌注冰冻(4℃)4%多聚甲醛XmL,断头取脑,多聚甲醛浸泡固定24小时。1.多聚甲醛的配置：一般方法为：4％多聚甲醛PBS