课件：实验三显微镜油镜的使用及细菌形态观察.ppt

THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 由于革兰氏阳性菌细胞壁主要由肽聚糖形成网状结构、壁厚、类脂质含量低，脱色时网孔收缩，结晶紫—碘不易被洗脱而保留在细胞内，复染时仍保持蓝紫色。 而革兰氏阴性菌由于细胞壁的肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时类脂被乙醇溶解，细胞壁透性增大，结晶紫—碘复合物被洗脱，复染时细胞被染上复染剂的颜色（红色）。 大肠杆菌 葡萄球菌 三、革兰氏染色的操作方法 无菌操作 涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 镜检 （1）涂片：先在载玻片上滴一滴生理盐水，再在菌平板上取一小环培养24小时的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌菌体于生理盐水中涂片（，分别于斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜），把菌液充分涂开，使其分布均匀。 注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多，涂片要均匀，不可过于浓厚 载玻片 水滴 菌体 涂片 染色前必须固定细菌，其目的是： 一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。 二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形态。 ⑵ 干燥：把上面涂好的片于室温下自然干燥。 ⑶ 涂面朝上，在火焰上方过几次以热固定菌体（此操作的目的是使得细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上）。固定时通过火焰1—2次即可。 注意：不可过热，以载玻片不烫手为宜，温度过高会改变甚至破坏细胞形态。 ⑷ 初染：滴数滴结晶紫于菌膜上（以刚好完全覆盖菌膜为宜）初染1--2分钟min，水洗。 ⑸ 媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖约1min，水洗。 ⑹ 脱色：用滤纸吸去载玻片上面的残水，将玻片倾斜，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20—30s，立即用水冲净酒精。 注意：革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是整个操作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。 ⑺复染：用番红液染1—2min,水洗。 ⑻镜检：干燥后（室温下晾干），置油镜观察（先在低倍镜，然后在油镜下观察菌体细胞的形态）。革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。 注意：以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。 （9）同法在一载玻片上以大肠杆菌与金黄色葡萄球菌混合制片，作革兰氏染色对比。 (10). 实验结果的记录： 要求在用显微镜观察（左眼观察）的同时在实验记录本上画下你所观察到的细菌的形态。 本实验每人做一张。 实验报告中要画图表示结果。 思考题 1.涂片为何要固定？固定加热时间过长会怎样 2.分析影响革兰氏染色结果的因素。 一、实验目的 熟悉芽胞染色的方法 （四）芽胞染色 二、芽胞染色的原理 细菌的芽胞具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽胞不着色(芽胞呈无色透明状)。芽胞染色法就是根据芽胞既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。所有的芽胞染色法都基于同一个原则：除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽胞着色。当染芽胞时，菌体也会着色，然后水洗，芽胞染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽胞呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽胞，便于观察。 三、芽孢染色法步骤 (1)取37℃培养24h ～36h的枯草芽孢杆菌作涂片，并干燥，固定。 (2)于载片上滴入3～5滴5％孔雀绿水溶液。 (3)用试管夹夹住载玻片在火焰上用微火加热，自载玻片上出现蒸汽时，开始计算时间约4～5min。加热过程中切勿使染料蒸干，必要时可添加少许染料。 (4)倾去染液，待玻片冷却后，用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。 (5)用0.5％沙黄水溶液(或0.05％碱性复红)复染1min，水洗。 (6)制片干燥后用油镜观察。芽孢呈绿色，菌体红色。 供芽孢染色用的菌种应控制菌龄，使大部分芽孢仍保留在菌体上为宜 本实验每人做一张。 实验报告中画图表示结果。 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 可编辑 可编辑 实验三 油镜使用和细菌形态观察 1、显微镜油镜的使用 2、细菌形态的观察（示教） 3、革兰氏染色 4、芽胞染色 一、实验目的 学习并掌握普通光学显微镜的构造和油镜的使用技术及维护的基本知识 （一）显微镜油镜的使用 二、显微镜及油镜使用原理 显微镜的构造 1.光学部分目镜 、 物镜 、 照明装置(聚光镜、 虹彩光圈、 反光镜等)。它使检视物放大,生成物象。 2.机械部分:镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件.它起着支持、调节、 固定等作用. 图1-1-2 光学显微镜的成像原理 倒立的虚像 显微镜的放大倍数