M电流调节与大鼠SCG神经元兴奋性的关系.pdfVIP

中文摘要 流可接受众多神经递质与激素的调节，包括：乙酰胆碱 II)、黄体生成素释放激素(LHRH)等。它 (Angiotensin 们通过激活相应的G蛋白偶联的受体(GPCR)或通过影 M电流，进而发挥调控神经系统兴奋性的作用。 除GPCR外，其他种类的受体如受体酪氨酸蛋白激酶 ． (R1Ks)类等对M通道的作用研究很少。 神经生长因子(nerve factor，NGF)是神经营 growth 生长因子外，本家族还包括脑源性神经营养因子(Brain- derived Neurotrophic 神经营养因子7(NT-7)等。神经营养因子广泛存在于神经 系统中并通过相应受体来调节神经元的存活、增殖、分化， 神经突起的生长及重要的功能蛋白质如受体蛋白、离子通 道蛋自等的表达；除此之外，神经营养因子还能调节神经 元之间突触的形成和传递，神经递质的释放以及长时程增 强作用等。 神经生长因子的受体有两种：一是原肌凝蛋白相关受 kinase related 体A(TropomyosinA，TrkA)，属于受体酪氨 酸蛋白激酶家族；一是泛神经营养因子受体p75NTR，即神 经营养因子家族成员的共同受体，属于肿瘤坏死因子家族 受体。 两分子神经生长因子结合于TrkA受体，可引起受体 中文摘要 二聚化、自我酪氨酸磷酸化而激活受体。受体激活后可活 化细胞内一系列的级联反应，包括PLC，介导的PIP2水解 及产生细胞内第二信使分子、磷脂酰肌醇3激酶(PI一3 Ras蛋白介导的MAPK级联反应和细胞内广泛的非受体 酪氨酸蛋白激酶活性等。两分子NGF结合于p75Nm可激 活细胞内JNK和NF．r．B信号通路介导神经元的凋亡等过 程，也可激活鞘磷脂酶分解细胞膜鞘磷脂产生神经酰胺， 调节细胞内一些复杂的生物过程。 神经生长因子的生物学作用多是一种慢效应，依赖 于对基因转录和表达的调控。但是，越来越多的证据表明， 神经生长因子还表现出快速调节作用，如调节神经递质的 释放，神经元突触的传递，离子通道的功能和神经元的兴 奋性等。 综上所述，本实验以大鼠SCG神经元为平台，观察 了交感神经元兴奋性与M电流的特征，及其二者的关系。 在此基础上，观察了NGF对M电流及神经元兴奋性的影 响，并初步探讨了可能的分子机制；此外，我们比较了 NGF与传统的M电流调节剂如M胆碱受体激动剂Oxo-M 目的：分离培养大鼠SCG神经元，利用膜片钳技术 记录神经元动作电位和M通道电流，(1)观察SCG神经 元兴奋性及M电流的特征；(2)确定神经元兴奋性及M 奋性的特征；(4)初步探讨NGF对M通道作用的机制。 中文摘要 方法：(1)SCG神经元的分离与培养：取4-6周龄的 SD大鼠，雌雄不限，迅速摘取其颈上神经节，经过剪切、 消化、沈酶、重悬、种植等过程，生化培养箱37。C， 5％C02+95％混合气，培养ld后用于膜片钳记录。2d内使 用完。要求：无菌，低温，操作迅速。(2)电生理学实验： 利用打孔膜片钳技术和全细胞膜片技术，记录神经元动作 电位和离子通道电流，给予Oxo-M、LP、NGF等，观察 这些药物对神经元兴奋性和通道电流的作用并分析其作 用机制。要求：①相同条件的灌流给药和②严格有效的实 验对照。 结果：(1)根据在去极化电流的刺激下动作电位爆发 的个数不同，大鼠SCG中存在三种具有不同电生理特征 的神经元，分别为：phasic-1，只爆发一个动作电位，占 神经元为主。以动作电位爆发的个数为主要指标，结合静 息电位、爆发的潜伏期及动作电位间期、静息电位与阈电 位的差值等4个方面对三类神经元进行比较，观察它们兴 奋性的特点。统计数据表明：三类神经元两两间比较动作 电位爆发个数均存在显著的差异(pO．01)，相同条件下 中文摘要 奋性较phasic神经元高。(2)三类神