IL-21对HIV感染者调节性T细胞的作用分析.pdfVIP

·中文论著摘要· IL．21对HIV感染者调节性T细胞的作用研究 目 的 immune 艾滋病(AIDS)又名获得性免疫缺陷综合症(Acquireddeficiency syndrome)，是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的一种严重传染病。高效抗逆转录 activeantiretroviral 病毒治疗(highly 缓HIV感染的疾病进程，但治疗后部分患者免疫重建不佳。如何有效恢复T细胞 的功能，增强机体免疫系统的抗病毒能力，对于HIV感染免疫治疗及疫苗研究具 有重要意义。 白细胞介素．21(IL．21)是共用丫链(丫c)细胞因子的新成员，在免疫应答中发 挥重要作用。在HIV感染中，IL。21可显著增加CD8+T细胞穿孔素及粒溶素等抗 病毒功能，更重要的是，其发挥功能的同时，不加重机体的免疫激活，对增强抗 HIV免疫应答，抑制免疫活化及免疫重建具有重要意义，被认为是有希望应用到 HIV感染临床治疗及疫苗佐剂研究的重要因子。IL．2l的临床治疗发展的最大障 碍，亦是决定因素，在于IL．21所带来的免疫效应能否转化为病死率和发病率的 降低，能否改善疾病的转归。例如，在应用IL．2治疗HIV感染者的临床实验中， ．尽管CD4+T细胞的数量显著增加，但由于IL．2能扩增Treg亚群，导致免疫功能 T 受到抑制，患者存活率没有改善。调节性T细胞(regulatorycell，Treg)抑制免疫 激活，也抑制免疫细胞功能，是免疫系统的重要调节因子之一。细胞因子对Treg 的影响在其应用于HIV感染治疗及疫苗中不可忽视，明确IL一21对HIV感染者 报道，明确其对Treg的影响对其在HIV感染治疗中的应用具有重要意义。作为 共用丫c细胞因子家族的成员，IL．7及IL．15在肿瘤的临床治疗中发挥作用，亦应 用到HIV感染治疗，但其对Treg的影响研究结果尚不一致。HIV感染中，IL．7 作用的差别亦无报道。 本研究对HIV感染者IL-21及Treg在疾病进展中的变化进行研究，并分析 。细胞因子对Treg的影响，为进一步明确HIV的致病机制及艾滋病的免疫治疗提供 线索。 方 法 l、研究对象 58例无症状HIV慢性感染者(HIV)均来自中国医科大学附属第一医院红丝 带门诊，感染途径多为男男性接触，感染时间一年以上，在检测时间点均未接受 均接受治疗)。25例健康对照为随机抽取的HIV抗体阴性、未暴露于HIV的健康 人(NC)，HIV及NC组年龄、性别经检验均无显著性差异。本研究内容获得参 加者的书面知情同意。 2、Treg细胞比例、绝对值检测 两管ixl06PBMC中加入anti．CD3．Pe疋P、anti．CD4．APC．CY7、 细胞破膜染色试剂盒标准操作进行细胞破膜、胞内染色(anti．FoxP3．APC标记的 FACSDivaTM软 荧光抗体)，洗涤并固定细胞。使用BDLSRII流式细胞仪及BD 对值检测结果的乘积即得到Treg细胞绝对数量。 3、CD4+IL．21+T细胞检测 胞(CD3+CD8．T细胞)，分析IL．21的表达。 2 提取人PBMC，用2uM CD4+CD25+CDl2710w／-Treg及CD4+、CD8+T细胞增殖。 5、CD4+CD25+CD127low／．Treg及CD4+／CD8+T细胞凋亡 127．APC标记的荧 光抗体冰上避光染色，洗涤，之后加入anti—AnnexinV-PE及anti．7．AAD，室温避 Annexin V及7-AAD的表达量，1h内检测完成。。 光抗体冰上避光染色，洗涤，细胞破膜，加anti．CTLA．4．PE，避光染色，洗涤细 胞后，细胞固定，FACSAria流式细胞仪