海洋种质资源的保存.pptVIP

第九章 种质资源的保存 （1）概论 （2）掌握大型藻类的纯种保存方法 （3）掌握海洋微型生物的冷冻保存方法 （4）了解海洋动物生殖细胞的冷冻研究现状，并掌握其保存方法 目 录 大型藻类纯种保存方法 海洋动物生殖细胞的冷冻保存 海洋微型生物的冷冻保存 存在问题分析 遗传背景清楚的纯系实验生物尚未开发出来。之所以如此，海洋生物在放在人工管理条件下，进行饲育和繁殖困难程度大、经济成本高和保存难度大造成的。 海洋生物学领域，实验材料始终依赖天然生物，纯系实验生物仍未确立，如果作为实验材料，难以保证实验数据的重复性。 低温生物学 自从1949年Ploge，Smith和Parkes发现甘油在细胞低温保存中有抗冻作用后，对生物细胞和组织的低温冷冻保存研究迅速展开，并形成了一门新兴的学科—— 低温生物学。低温生物学主要是研究在低温(一般0～-196℃)条件下生物的形态结构、生理生化等生命现象的变化规律；以及对细胞、组织、器官乃至整个生物体活性保存的一门边缘学科。发展此项技术的意义在于克服时间和空间的条件限制进行人工繁殖，并且为品系纯化及遗传基因多样性保护提供技术支持。 海洋植物的冷冻保存 一、大型海藻种质保存 海洋藻类的保存工作起始于20世纪初期对海洋微藻的保护，国际著名的海洋微藻保存机构CCAP、SAG、UTEX、COBRA等主要进行海洋微藻种质资源的保存，其种质保存的数量超过了2000多种，种质收集范围也从早期的区域性海藻种类发展到世界范围内海藻种质采集工作。上述国际海藻种质资源保存主要以微型藻类为主，很少有关大型海藻种质保存的报道，种质保存的方式以细胞继代培养为主，仅CCAP报道了超低温保存。 中国已经发展和建立了一系列大型海藻种质资源保存技术，收集和保存了大量具有生产应用价值的海藻遗传资源，为大型海藻的种质保存做出了较为突出的贡献。目前，已经建立低温弱光保存技术、固体保存技术、组织(愈伤)培养、单倍体克隆和超低温保存技术，实现了包括海带、紫菜、裙带菜的种质资源库建设。 大型海藻种质冷冻保存的方法 目前大型海藻种质保存技术按照保存温度可分两大类：传统的低温弱光保存(一般为8-12℃)和以低温(4℃)、冷冻(-40℃)、低温真空冷冻干燥和超低温(-196℃)为主的冷冻保存。 低 温 弱 光 保 存 传统的低温弱光保存是目前较常用的一种大型海藻种质保存的方法，该方法是在适宜的光照、温度条件下，利用液体培养基保存海藻细胞。低温弱光条件下海藻细胞的代谢水平较低，能够在一定程度上实现海藻种质的长期保存。现在海带、紫菜和裙带菜等大型藻的种质保存一般采用这种方法。 海 带 配 子 体 海带配子体是一种以有丝分裂方式进行细胞增殖的微小藻体，并可通过两性生殖或单性生殖发育成大型叶状体。目前，海带种质资源保存技术主要是海带配子体的低温弱光保存，通过低温(4℃)和弱光[1～2 Eμmol／(cm2.s)]来抑制海带配子体克隆细胞的生长和发育，使其进行缓慢的有丝分裂，以达到长期保存的目的，利用该技术保存的海带配子体及配子体克隆最长已达26a的时间(1978年保存的“无性繁殖系1号”)。 冷 冻 保 存 生物材料之所以在低温下能够长期保存，是因为低温能抑制生物细胞的生化活动，尤其在超低温条件下，细胞的整个代谢活动等都几乎完全停止，可排除遗传性状的变异，同时保存细胞活力。因此该方法能有效解决海藻种质保存中的污染、混杂和变异问题，有望实现藻类种质的长期保存。目前用于大型海藻低温冷冻保存的方法主要有以下几种。 低 温 保 存 4℃的低温能够在一定程度上抑制生物细胞的生化活动、保持生物细胞活力，是一种常见的海藻种质保存方法。 冷 冻 保 存 -40℃低温能够抑制生物细胞的生化活动、可排除遗传性状的变异，可用于多数海藻种质保存，对于冷敏感的海藻细胞除外。 低温真空冷冻干燥法 1967年Holm-Hansen用该法成功保存了2种蓝绿藻和4种绿藻。低温真空干燥技术的基本方法是先将生物材料低温冻结，然后用真空技术将物料中的水分抽干，使之干燥。 超 低 温 保 存 超低温保存是指在低共熔点(约为-135～-139℃)以下的温度保存材料，通常采用液态氮作冷媒。超低温保存能够长期保持生物遗传稳定性，是目前保存活体生物材料最为有效的方法。 超低温保存藻类的研究开始于20世纪60年代，之后的20年里主要对各种淡水、海洋微藻的保存进行了较为深入的研究，但很少有关于保存大型海藻的报道。直到进入20世纪80年代才对大型海藻的超低温保存给予了更多关注，采用的方法主要以两步法为主，近年来又发展了胶囊化-脱水法和玻璃化法，并开始应用于大型藻类的冷冻保存。 一 步 法 一步法对早期的冷冻保存方法进行改进，在生物材料中加入甘油或DMSO(二甲基亚砜)后再投入液氮中保存。但是，一步法对含