中药指纹图谱 .PPTVIP

3.1.3 研究内容 根据国家药品监督管理局下发的《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》（暂行）的规定，主要研究内容有原药材、中间体、注射剂的指纹图谱，涉及样品名称、来源、制备、测定方法、指纹图谱及技术参数等研究项。 3.2 原药材、中间体及注射剂样品选择与收集 中药是天然产物，中药的活性成分都是次生的代谢产物，本身有它内在的不稳定性。我国药材品种多、产地广、分散度大，造成了中药材基源复杂，形成许多同名异物的品种，这些品种在传统中医临床中并未加以细分，其中多数已收入《中华人民共和国药典》。对于《中国药典》收载的品种，从中医的角度均可入药，这种多基源药材增加了色谱指纹图谱研究的难度。 近年由于药材量需求增大，药材资源破坏严重，药材内在质量下降，炮制加工的粗放造成有效成分的流失，人为因素造成了药材质量不稳定，不利于色谱指纹图谱的研究与应用。 我国药材GAP工程已起步，将有利于中药注射剂及其它制剂的质量控制。 已生产的注射剂，因生产中药材来源基本确定，在补充其指纹图谱时，原药材样品的收集应遵循以下原则： ①药材尽可能固定产地（如道地药材）、采收期、炮制方法； ②对已往生产使用过的药材应结合临床使用情况选择收集样品，对工艺稳定、疗效恒定、临床使用中很少出现异常医疗事故的药材批次应重点选择； ③另外还应收集不同产地、不同采收期的药材，这些药材虽然含量高低不同，组成比例各异，但当正常使用的药材一旦出现偏差时，可通过这些批次的药材实行合理“勾兑”。通过对指纹图谱的研究，可以对“勾兑”过程进行指导。 中间体、注射剂因其生产工艺已经恒定，样品的收集原则也应重点选择工艺稳定、疗效恒定、临床使用中很少出现医疗事故的批次。 根据《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》（暂行）之规定，原药材、中间体及注射剂样品至少应收集10批次。不可以同一批次的样品分散成数个批次，充当样品。 3．3 原药材、中间体及注射剂的预处理 在指纹图谱研究过程中，供试品（原药材、中间体及注射剂）溶液的制备过程不是关键性的技术问题，但操作烦琐。 原药材的供试品制备最为复杂。原药材所含的多种组分混杂在一起，样品制备时，应根据所含成分和物理化学性质，通过萃取、沉淀、吸附或通过化学反应，分离富集样品。 如：黄芪药材中的黄酮类成分通过碱水萃取，皂苷类成分通过大孔树脂吸附；苦参中的总生物碱通过阳离子树脂吸附与解吸附。 中间体是原药材经过了多步处理而得，已经滤过了大部分成分，只保留一小 部分有效组分，样品制备时，可针对有效成分处理，并参照原药材的制备方法。 样品富集后，尚需过氧化铝预柱、C18预柱、硅胶预柱、聚酰胺预柱等，以除去色素等杂质，避免干扰或对色谱柱的损耗。 注射液中除少数品种添加助溶剂外，所含化学成分均具有较好的水溶解性能，面且研究生产工艺时考虑到色素、生物大分子等因素，生产过程中已通过微孔滤膜、脱色等操作，因此，样品无需特殊处理，可直接分析检测。 3.4 色谱条件选择 指纹图谱的色谱条件是研究检测方法过程中最重要、关键性的内容。 我们以HPLC法为例，阐述各影响因素及解决途径。 3.4.1 流动相 可用作流动相的溶剂有：乙腈、甲醇、乙醇、四氢呋喃、氯仿、二氯甲烷、正已烷等。反相高效液相，以乙腈-水系统比较适合梯度洗脱。醇-水系统由于热力学和可压缩性因素，在梯度洗脱时易导致基线漂移。 在流动相中可加入磷酸、乙酸、三乙胺、二乙胺、正丁基溴化胺、十二烷基磺酸钠等各种改性剂，或采用磷酸-磷酸氢二钠/磷酸二氢钠、乙酸-乙酸钠缓冲溶液，以达到改善色谱峰分离程度及改善峰形的目的。 样品中如有部分成分的极性较小，在流动相中可加入少量异丙醇、四氢呋喃、氯仿、环糊精等，增加流动相对样品的溶解性，一方面改善峰形，另一方面可快速洗脱。 对黄酮类、酚酸类成分可参考选择乙膊-水-酸系统的流动相；对皂苷类成分可参考选择乙腈-水系统的流动相，生物碱类成分可参考选择乙腈-水-三乙胺等系统的流动相。 3.4.2 检测波长 选择有以下方法： ①参照样品的全波长紫外线吸收图，选择吸收峰值； ②参照对照品的全波长紫外线吸收图，选择吸收峰值； ③根据君、臣、佐、使的组方理论，在尽可能兼顾佐使药的同时，主要选择君、臣药中有效成妥的及收峰值。 一个检测波长下的色谱图如不能达到控制质量的目的，可建立多个检测波长下的指纹图谱。 3.4.3 柱温 柱温的选择与恒定是影响指纹图谱技术稳定的主要因素之一。适宜的柱温不仅影响色谱峰的分离效果，而且柱温发生变化将导致色谱峰