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SDS
SDS:聚丙烯酰胺凝胶电泳
Acr:丙烯酰胺;配胶时用30%Acr(质量比Acr:Bis=29:1)
Bis:甲叉双丙烯酰胺
DDW:超轻水
SDS:十二烷基硫酸/磺酸钠,阴离子去污剂(配胶时用10%)
APS:过硫酸铵NH4S2O4配胶时用10%
TEMED:四甲基乙二胺,促凝剂
Tris-Hcl:3羟基氨基甲烷盐酸缓冲液,配胶时(分离胶ph=8.8,浓缩胶ph=6.8)
DTT:二硫苏糖醇,DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原,可用于阻止蛋白质中的 半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。
IMA:碘乙酰胺,碘代乙酰胺用于有机合成,在蛋白组学中组氨酸和半胱氨酸的烷基化试剂,用于多肽测序以及酶抑制剂等,蛋白组学级试剂。 CH2ICONH2,是和碘乙酸一样,可通过下列反应不可逆地抑制SH酶类的物质。
根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,再按照下面的表格配制SDS的分离胶(即下层胶):
SDS分离胶浓度
最佳分离范围
6%胶
50-150kD
8%胶
30-90kD
10%胶
20-80kD
12%胶
12-60kD
15%胶
10-40kD
成分
配制不同体积SDS分离胶所需各成分的体积(毫升)
6%胶
5
10
15
20
30
50
蒸馏水
2.0
4.0
6.0
8.0
12.0
20.0
30%Acr-Bis(29:1)
1.0
2.0
3.0
4.0
6.0
10.0
1M Tris,pH8.8
1.9
3.8
5.7
7.6
11.4
19.0
10%SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.3
0.5
10%过硫酸铵
0.05
0.1
0.15
0.2
0.3
0.5
TEMED
0.004
0.008
0.012
0.016
0.024
0.04
成分
配制不同体积SDS分离胶所需各成分的体积(毫升)
8%胶
5
10
15
20
30
50
蒸馏水
1.7
3.3
5.0
6.7
10.0
16.7
30%Acr-Bis(29:1)
1.3
2.7
4.0
5.3
8.0
13.3
1M Tris,pH8.8
1.9
3.8
5.7
7.6
11.4
19.0
10%SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.3
0.5
10%过硫酸铵
0.05
0.1
0.15
0.2
0.3
0.5
TEMED
0.003
0.006
0.009
0.012
0.018
0.03
成分
配制不同体积SDS分离胶所需各成分的体积(毫升)
10%胶
5
10
15
20
30
50
蒸馏水
1.3
2.7
4.0
5.3
8.0
13.3
30%Acr-Bis(29:1)
1.7
3.3
5.0
6.7
10.0
16.7
1M Tris,pH8.8
1.9
3.8
5.7
7.6
11.4
19.0
10%SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.3
0.5
10%过硫酸铵
0.05
0.1
0.15
0.2
0.3
0.5
TEMED
0.002
0.004
0.006
0.008
0.012
0.02
成分
配制不同体积SDS分离胶所需各成分的体积(毫升)
12%胶
5
10
15
20
30
50
蒸馏水
1.0
2.0
3.0
4.0
6.0
10.0
30%Acr-Bis(29:1)
2.0
4.0
6.0
8.0
12.0
20.0
1M Tris,pH8.8
1.9
3.8
5.7
7.6
11.4
19.0
10%SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.3
0.5
10%过硫酸铵
0.05
0.1
0.15
0.2
0.3
0.5
TEMED
0.002
0.004
0.006
0.008
0.012
0.02
成分
配制不同体积SDS分离胶所需各成分的体积(毫升)
15%胶
5
10
15
20
30
50
蒸馏水
0.5
1.0
1.5
2.0
3.0
5.0
30%Acr-Bis(29:1)
2.5
5.0
7.5
10.0
15.0
25.0
1M Tris,pH8.8
1.9
3.8
5.7
7.6
11.4
19.0
10%SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.3
0.5
10%过硫酸铵
0.05
0.1
0.15
0.2
0.3
0.5
TEMED
0.002
0.004
0.006
0.008
0.012
0.02
注:如果配制非变性胶,参考上述配方,不加10%SDS即可配制成非变性PAGE胶。
按照如下表格配制SDS的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶):
成分
配制不同体积SDS浓缩胶所需各成分的体积(毫升)
5%胶
2
3
4
6
8
10
蒸馏水
1.4
2.1
2.7
4.1
5.5
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