SDSPAGE分离胶浓缩胶配方.docVIP

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SDS SDS:聚丙烯酰胺凝胶电泳 Acr:丙烯酰胺;配胶时用30%Acr(质量比Acr:Bis=29:1) Bis:甲叉双丙烯酰胺 DDW:超轻水 SDS:十二烷基硫酸/磺酸钠,阴离子去污剂(配胶时用10%) APS:过硫酸铵NH4S2O4配胶时用10% TEMED:四甲基乙二胺,促凝剂 Tris-Hcl:3羟基氨基甲烷盐酸缓冲液,配胶时(分离胶ph=8.8,浓缩胶ph=6.8) DTT:二硫苏糖醇,DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原,可用于阻止蛋白质中的 半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。 IMA:碘乙酰胺,碘代乙酰胺用于有机合成,在蛋白组学中组氨酸和半胱氨酸的烷基化试剂,用于多肽测序以及酶抑制剂等,蛋白组学级试剂。 CH2ICONH2,是和碘乙酸一样,可通过下列反应不可逆地抑制SH酶类的物质。 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,再按照下面的表格配制SDS的分离胶(即下层胶): SDS分离胶浓度 最佳分离范围 6%胶 50-150kD 8%胶 30-90kD 10%胶 20-80kD 12%胶 12-60kD 15%胶 10-40kD 成分 配制不同体积SDS分离胶所需各成分的体积(毫升) 6%胶 5 10 15 20 30 50 蒸馏水 2.0 4.0 6.0 8.0 12.0 20.0 30%Acr-Bis(29:1) 1.0 2.0 3.0 4.0 6.0 10.0 1M Tris,pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5 TEMED 0.004 0.008 0.012 0.016 0.024 0.04 成分 配制不同体积SDS分离胶所需各成分的体积(毫升) 8%胶 5 10 15 20 30 50 蒸馏水 1.7 3.3 5.0 6.7 10.0 16.7 30%Acr-Bis(29:1) 1.3 2.7 4.0 5.3 8.0 13.3 1M Tris,pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5 TEMED 0.003 0.006 0.009 0.012 0.018 0.03 成分 配制不同体积SDS分离胶所需各成分的体积(毫升) 10%胶 5 10 15 20 30 50 蒸馏水 1.3 2.7 4.0 5.3 8.0 13.3 30%Acr-Bis(29:1) 1.7 3.3 5.0 6.7 10.0 16.7 1M Tris,pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02 成分 配制不同体积SDS分离胶所需各成分的体积(毫升) 12%胶 5 10 15 20 30 50 蒸馏水 1.0 2.0 3.0 4.0 6.0 10.0 30%Acr-Bis(29:1) 2.0 4.0 6.0 8.0 12.0 20.0 1M Tris,pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02 成分 配制不同体积SDS分离胶所需各成分的体积(毫升) 15%胶 5 10 15 20 30 50 蒸馏水 0.5 1.0 1.5 2.0 3.0 5.0 30%Acr-Bis(29:1) 2.5 5.0 7.5 10.0 15.0 25.0 1M Tris,pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02 注:如果配制非变性胶,参考上述配方,不加10%SDS即可配制成非变性PAGE胶。 按照如下表格配制SDS的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶): 成分 配制不同体积SDS浓缩胶所需各成分的体积(毫升) 5%胶 2 3 4 6 8 10 蒸馏水 1.4 2.1 2.7 4.1 5.5

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