温自家抗体血清学检测.ppt

甘氨酸-EDTA法去除IgG抗体（2） 方法： 待处理红细胞盐水洗涤6次 酸化-甘氨酸-EDTA液：甘氨酸-HCl和EDTA按照20：5的体积比混合。 在试管中将红细胞和酸化-甘氨酸-EDTA液按照10：20体积比充分混合，室温孵育2~3分钟。 向试管中添加1体积的Tris-NaCl, 混匀后于900-1000g离心1分钟，弃上清液，盐水洗涤红细胞4次。 用抗-IgG检测洗涤后的红细胞，确认DAT阴性，表明包被在红细胞上的IgG抗体已经去除。 氯喹放散法（1） 试剂： 二磷酸氯喹：20g二磷酸氯喹溶于100ml盐水，用1N NaOH调节pH到5.1。 DAT阳性的红细胞（包被IgG） 对照细胞（已知部分血型） 抗-IgG血清 氯喹放散法（2） 方法： 0.2ml盐水洗涤的压积红细胞和0.8ml氯喹液混合。室温放置30分钟。同时做对照。 取出部分细胞，盐水洗涤4次，进行DAT试验，如果DAT为阴性，则放散完成，将全部处理后的细胞洗涤备用。否则继续处理30分钟后检测。 WAIHA的DAT 单纯IgG抗体引起 20~ 66% IgG+C3 24~63% 单纯C3 7~14% 极少数：IgA或问反应性IgM抗体 温自身抗体DAT反应结果 多特异性AHG 3+ ~ 4+ 抗-IgG 3+ ~ 4+ 抗-C3 0 ~ 3+ 阴性对照 0 温自身抗体的反应格局 盐水立即离心 37℃ IAT I 0 0 0～4+ II 0 0　　 0～4+ WAIHA的抗体筛查及抗体鉴定 患者的病历信息 分析产生DAT阳性的原因 只有自家抗体（无免疫史） 自家抗体可能合并同种抗体（有免疫史） 药物抗体（治疗用药情况） 患者的病历信息 临床诊断 原发性：无任何关联疾病的情形下发生 继发性：其他疾病相合并发生：如淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、系统性红斑狼疮、其他自家免疫疾病、卵巢肿瘤以及其他慢性炎症。 治疗所用药物 有好几种药物可以诱导产生和WAIHA一样的血清学反应。如：甲基多巴和甲基苄肼。 免疫史（输血史、妊娠史） 输血史对于判定患者血清中的是否存在同种抗体非常重要。据报道，15~40%的有输血史或妊娠史的WAIHA患者血清中除自身温抗体外，还伴随有同种抗体。 WAIHA的抗体筛选和鉴定 无免疫史的WAIHA检测：直接进行抗体鉴定，检测抗体特异性，如果有特异性，选择无对应抗原的血液可以输用。 有免疫史的WAIHA患者检测： 放散试验 吸收试验： 无近期（2~3月内）输血史患者：采用自身吸收 近期有输血史或严重贫血的患者：采用异体吸收 抗体筛查及抗体鉴定 药物诱导产生的AIHA，采用放散试验，检测放散液 增强自身抗体强度的方法 PEG-IAT 微胶柱 固相化技术 酶 自身细胞放散试验目的 确定是否存在温自身抗体 确定DAT阳性的原因是否是同种抗体引起而不存在温自身抗体。 放散液和一些试剂红细胞出现阴性反应表明血清中存在特异性同种抗体。 确定是否是药物引起的免疫性溶血性贫血： 放散液反应阴性可能是药物依赖性抗体导致的，由于放散液中缺乏药物，所以产生阴性反应。 WAIHA样本何时进行放散 评估第一个样本 首次放散的目的是来确认温自身抗体引起的WAIHA，从而排除药物依赖性抗体的干扰。放散液必须和所有的试剂红细胞产生典型的阳性反应。 每个样本： 不需要对WAIHA患者的每一份都进行放散，因为血清学反应格局不会因为同一患者不同样本而轻易发生改变。 简单的血清学检验已经表明是WAIHA，仍然需要进行放散检测 ： 可以确定是否存在药物依赖性抗体，如果药物导致，则更换治疗药物。 如果放散液中有同种抗体，则可能和抗体鉴定谱细胞产生阳性反应。产生DAT/自身对照为阳性的原因不一定全部是患者的抗体引起的，如患者最近输注了已经包被抗体的供者红细胞。 温自身抗体的特异性 大多数是多特异性抗体，且和Rh系统抗原相关。用Rhnull或D--细胞来鉴定 。 类似特异性：如类似抗-c,抗-e特异性（指此抗体和具有该抗体对应抗原的红细