实验五微生物培养基配制与灭菌.PPTVIP

放入杀菌锅 (Autoclave) 灭菌 培养基配制 – 灭菌 加水盖过铁板 放东西 关门 调整温度时间 关紧泄压阀 注意事项 – 杀菌锅的使用 注意事项 – 杀菌釜使用 灭菌结束后，等压力降回零时才可打开门 进入杀菌釜 之物品，盖子不可关太紧或太松 注意事项 – 杀菌釜使用 拿灭菌后物品请记得带耐热手套 培养基配制 – 平板培养基 灭过菌之固态培养基于无菌操作台 (Laminar flow)内倒制平板培养基 (Plate) 日光灯 UV灯 风扇 培养基和玻璃器材的灭菌方法 培养基和玻璃器材的灭菌方法 间歇灭菌法： 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天蒸煮1次，每次煮沸1h，连续3d重复进行。在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基）放在370C恒温条件下培养过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营养体，以便下次蒸煮时杀灭。 培养基和玻璃器材的灭菌方法 过滤除菌法： 不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。 培养基和玻璃器材的灭菌方法 紫外线灭菌法： 一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。 培养基和玻璃器材的灭菌方法 化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是杀菌剂，有的是抑菌剂。 培养基和玻璃器材的灭菌方法 本次实验报告内容 记录本实验配制培养基的名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。 思考题 固体培养基加琼脂的作用是什么？ 干热灭菌和高压蒸汽灭菌和有何不同？ 培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌?若不能及时灭菌应如何处理?已灭菌的培养基如何进行无菌检查? 实验五第二节微生物检验的基本操作技术 主要内容 无菌技术 M的接种与分离技术 微生物的培养方法 微生物的生长现象与观察 （一）什么是无菌技术 　　指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。 （二）无菌环境 无菌室 无菌柜 超净工作台 1、无菌室 （1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间 （2）无菌室的消毒和防污染 每日（使用前）紫外线照射（1~2小时）. 每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）. 每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。 2、超净工作台 ??? 超净台的使用与保养: （1）风速保持在0.32-0.48米/秒; （2）使用前开启紫外灯照射30分钟以上; （3）让超净台预工作10－15分钟; （4）使用完毕后，用70%酒精将台面和台内四周擦拭干净. （三）无菌器材 灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣等. 消毒器材：无菌室内的凳子、试管架、天平、工作台、手等 （四）无菌操作 1、目的： （1）是保证待检物品不被环境中微生物的污染； （2）是防止被检微生物在操作中污染环境或感染操作人员。 2、进入无菌室前的准备 （1）、定期检查无菌环境的空气是否符合规定； （2）、用紫外线灭菌处理30~60分钟； （3）、检查无菌器材是否完备； （4）、洗手消毒； （5）、手部消毒后，再穿戴无菌工作服。 3、检验操作过程的无菌操作要求 （1）、在操作中不应有大幅度或快速的动作； （2）、使用玻璃器皿应轻取轻放。 （3）、在正火焰上方操作； （4）、接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌； （5）、在接种培养物时，协作应轻、准。 （6）、不能用嘴直接吸吹吸管。 （7）、带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒。 无菌操作 斜面接种时的无菌操作 (1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞 1. 接种环前端铁丝部分以酒精灯烧红来菌，后端铁棒部分过火 无菌操作 – 取菌技巧 1 2. 试管前端过火 3. 打开试管盖 无菌操作 – 取菌技巧 1 4. 试