高中生物第四章生物化学与分子生物学专业技术实践第10课时分子生物学专业技术同步备课教学案苏教版选修1.docVIP

PAGE PAGE 1 第10课时　分子生物学技术 [学习导航]　1.结合教材了解PCR技术的基本操作。2.理解PCR扩增DNA片段的原理。 3.结合教材，尝试进行目的DNA片段的体外扩增。 [重难点击]　1.了解PCR技术的基本操作。2.理解PCR的原理。 一、使用PCR仪的安全措施和PCR反应程序 1.DNA分子的结构 (1)写出各个标号的名称：①胞嘧啶；②腺嘌呤；③鸟嘌呤；④胸腺嘧啶；⑤脱氧核糖；⑥磷酸基团；⑦胸腺嘧啶脱氧核苷酸；⑧氢键；⑨碱基对；⑩一条脱氧核苷酸链。 (2)DNA的两条链是反向平行的，为了明确表示DNA链的方向，通常将DNA的羟基末端称为3′端，将磷酸基团的末端称为5′端，按此原则在图上方框内标出两条链的方向。 答案　左链上5′端，下3′端；右链上3′端，下5′端。 2.细胞内DNA复制条件分析 条件 组分 作用 模板 DNA的两条单链 提供复制的模板 原料 四种脱氧核苷酸 合成DNA子链的原料 酶 解旋酶 打开DNA双螺旋 DNA聚合酶 催化合成DNA子链 能量 ATP 为解螺旋和合成子链供能 引物 RNA 为DNA聚合酶提供合成的3′端起点 3.PCR技术 (1)概念：在体外快速扩增特定基因或DNA序列(目的DNA片段)的技术称为PCR技术。 (2)物质条件：DNA模板、四种脱氧核苷酸、TaqDNA聚合酶、引物。 (3)PCR反应的过程及结果 ①PCR反应程序 a.变性：在94 ℃高温下，作为模板的双链DNA解旋成为单链DNA。 b.退火(复性)：反应体系的温度降至55 ℃，引物与作为模板的单链DNA上的特定部位相互配对。 c.延伸：反应体系的温度回升到72 ℃左右，按照单链DNA上的脱氧核苷酸序列，4种脱氧核苷酸根据碱基互补配对原则，在TaqDNA聚合酶的作用下连接到引物之后，使引物链延伸，形成互补的DNA双链。 ②结果 a.PCR扩增一般要经历三十多次循环，每次循环都包括变性、退火、延伸三步。 b.两引物之间的固定长度的DNA序列呈指数扩增。 1.PCR原理 PCR反应与体内DNA复制的引物在化学本质上是否相同？请分析原因。 答案　不相同。体内DNA复制所需引物为RNA聚合酶合成的一小段RNA，但PCR反应时所用引物一般是人工加入的一小段单链DNA。 2.PCR反应过程 (1)PCR反应中需要解旋酶和DNA聚合酶吗？若需要，则与细胞内DNA复制有何区别？ 答案　PCR反应不需要解旋酶，但需要DNA聚合酶。由于PCR反应中需要高温使DNA解旋，因此PCR所需的DNA聚合酶能耐高温。 (2)PCR的每次循环中应如何控制温度？请分析原因。 答案　每次循环中先高温解旋，再低温使引物与模板结合，最后适当升温有利于Taq DNA聚合酶发挥作用。 (3)结合下图分析PCR过程中DNA复制的方向是怎样的？ 答案　DNA的羟基(—OH)末端为3′端；磷酸基团的末端为5′端。当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的3′端开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。 归纳总结　PCR扩增与DNA复制的异同 项目 DNA复制 PCR扩增 不 同 点 时期 有丝分裂间期或减数第一次分裂的间期 任何时期 场所 活细胞内 细胞外 酶 解旋酶、DNA聚合酶 耐高温的Taq DNA聚合酶 引物 有转录，产生RNA作引物，无需人工加入 无转录，无引物产生，需人工加入两种DNA引物 特点 边解旋边复制 先全部解旋后开始复制 缓冲液 不需缓冲液 配制缓冲液代替细胞核液 设备 无 控制温度变化的温控设备 相 同 点 原理 严格遵循碱基互补配对原则 引物 都需要分别与两条模板链相结合的两种引物 模板 DNA的两条链为模板 特点 半保留复制 原料 游离的四种脱氧核苷酸 1.下列关于DNA复制和PCR技术的描述中，正确的是(　　) A.DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从5′端延伸DNA链 B.DNA复制不需要引物 C.引物与DNA母链通过碱基互补配对进行结合 D.PCR扩增的对象是氨基酸序列 答案　C 解析　DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，故DNA复制需要引物。DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链，而不能从5′端延伸DNA链。引物通过碱基互补配对原则与DNA母链相结合。PCR扩增的对象是DNA，不是氨基酸序列。 2.PCR技术有效地解决了因为样品中DNA含量太低难以对样品进行研究的问题，而被广泛应用，与细胞内的DNA复制相比，PCR可以快速扩增所需的DNA片段，请分析回答下列有关问题： (1)体内DNA复制过程中用解旋酶打开双链DNA，而PCR技术中的解旋原理是