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重要研究进展 ： 本课题组在脂代谢紊乱模式动物、高甘油三酯血症（HTG）和As关系、HDL功能、脂质组学、代谢组学的大量工作基础上，就建立新型脂代谢模式动物、HTG致As分子机制、不同HDL的作用和分子组成、LDL受体调节分子机制、以及相关的药物作用展开研究。 为了更加深入阐述脂代谢紊乱引起动脉粥样硬化的分子机制，验证实验性治疗效果，本年度的研究工作首先集中在建立多种HTG模式动物上，并取得了突破性的进展，在国际上首次建立了转基因仓鼠的制备方法。仓鼠是脂代谢和人类非常接近的小实验动物，同时它血浆中表达胆固醇酯转运蛋白（CETP），使得它的TG、HDL代谢和人类非常相似，甚至优于小型猪模型，因为猪不表达CETP。而小鼠大鼠则更和人类的脂代谢相差太远。本年度中转基因仓鼠制备方法的建立，为制备新型的更好的脂代谢疾病模式动物突破了技术障碍，研究论文发表于2014年Cell Research。 另外，小鼠模型上也建立了不同基因修饰的多种HTG模型。利用多种模型的优势，我们基本阐明了高甘油三酯血症下，载脂蛋白C3（ApoC3）对血管的作用机制、排除ApoC3富含TG脂蛋白对血管的作用机制，从而初步解决了一个长期困扰HTG研究的难题，即HTG和伴随升高的载脂蛋白对血管的作用的区分，所以在脂代谢紊乱致As的分子机制阐明上获得了创新性进展。研究论文投寄到Cardiovascul Res。 Seipin在甘油三酯的细胞内代谢分子机制上有重要作用，本年度进一步明确了seipin基因的功能和调控机制，通过双基因和多基因修饰的小鼠模型，探讨了对脂肪分化、动脉粥样硬化、神经功能、雄性生育殖的作用机制，研究论文分别发表于Diabetes，PNAS，Cell Metabolism和Hum Mol Gen等有重大影响的国际期刊上。 （一）基因工程仓鼠模型的建立： 动物模型与人类疾病的相似性是模型具有实用价值的基础。作为人类脂代谢紊乱动物模型，小鼠和人类病理生理方面差距很大，并不是最理想的模型。大动物虽然很多方面接近人类，但是作为实验动物，使用成本非常高，实验操作上存在很多困难，大多繁殖周期长。 仓鼠作为动物模型有很多优点，因此广泛地用于微生物学、牙科学、遗传学、免疫学、生理学、肿瘤学、药理学、毒理学、营养学以及老化、冬眠、行为等诸多生物医学领域的实验研究。在脂代谢特征方面，它不像其它啮齿类动物，却和人类相似，又易于操作，成本低，易繁殖，因此作为脂代谢研究的模式动物，其优势很明显。 遗憾的是，与小鼠、家兔以及大鼠不同，至今国内外没有基因工程仓鼠成功的报道，限制了其作为疾病模式动物的应用研究。我们有基因工程小鼠和家兔模型制备的工作基础，但做仓鼠时却发现受精卵回输后，代孕鼠无法受孕。在体外仓鼠卵培养时，发现以前做小鼠和家兔不曾遇到的双细胞阻滞现象。通过检索我们发现，美国马里兰大学分子神经病毒学实验室主任Robert G Rohwer教授2002年在National Prion Research Program项目中，委托著名生物技术公司TOSK Inc.制备用于疯牛病研究的转基因仓鼠，然而最终转基因仓鼠制备失败。虽然他们并没有报道失败的原因，据我们参加日本和西安举办的国际转基因动物模型会议了解到，吉林大学畜牧兽医学院、云南动物研究所以及匈牙利和法国曾经有研究组尝试仓鼠的胚胎操作，主要困难在于受精卵体外发育过程的“发育阻滞”（block of development）。 “发育阻滞”指哺乳类动物着床前早期胚胎体外培养时, 早期胚胎往往不能从受精卵发育到囊胚, 停顿在某特定发育时期。不同的动物种属发育阻滞的时期为, 大鼠早起胚胎发育阻滞发生在2细胞期，仓鼠发生在2-4细胞期，猪发生在4细胞期，人发生在4-8细胞期，弥猴、牛、绵羊和山羊都发生在8-16细胞期，兔发生在桑堪胚期。 本实验室经过不断试验各种方法，在去年下半年，通过特殊的培养技术，突破了仓鼠受精卵培养的双细胞阻滞。我们也做到了慢病毒透明带下注射和DNA核内注射后，受精卵体外培养能够发育到8细胞以上。 而我们发现，培养到4细胞以上的受精卵回输后，假孕鼠不受孕的难题得到了解决，从而，转基因仓鼠制备中一直困扰我们的瓶颈终于得到克服。 经过长期的探索，我们还逐步解决了转基因仓鼠制备中各个不同于小鼠的环节，并通过慢病毒透明带下注射感染受精卵，终于在2013年2月份出生了第一批GFP转基因荧光仓鼠，使我们确认已经获得了基因工程仓鼠制备技术的突破。这些基因工程仓鼠目前已经顺利建系，从两个funders稳定繁育了3-4代可以用于干细胞移植的eGFP转基因仓鼠（Gao. M et al: Generation of transgenic golden Syrian Hamsters. Cell Research, 2014; 2