纤维素分解菌课件.PPT

分解纤维素的微生物的分离 课题重难点： 从土壤中分离分解纤维素的微生物 ㈠纤维素与纤维素酶 1.纤维素 纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。 一、基础知识 土壤中某些微生物能够分解利用纤维素，原因是能产生 纤维素酶 2.纤维素酶 C1酶、Cx酶 葡萄糖苷酶 纤维素 纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括 三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶 纤维二糖 葡萄糖 练一练： 1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是 A. 纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种 B. 纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖 C. 纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁 D. 葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖 ①取二支20mL的试管 实验：纤维素酶分解纤维素的实验 ②各加入一张滤纸条 ③各加入pH4.8，物质量为0.1mol/L的醋酸－醋酸钠缓冲液11ml和10ml 甲 乙 ④在乙试管中加入1mL纤维素酶 ⑤两支试管固定在锥形瓶中，放在 140r/min的摇床上振荡1h ⑥结果： 乙试管的滤纸条消失 1、筛选纤维素分解菌的方法______________。该方法可以通过________反应直接筛选。 刚果红染色法 颜色 2、其原理是：刚果红可以与纤维素形成____________，当纤维素被_________分解后， 红色复合物无法形成，出现以_____________ 为中心的________，可以通过___________________________ 来筛选纤维素分解菌。 红色复合物 纤维素酶 纤维素分解菌 透明圈 是否产生透明圈 （二）纤维素分解菌的筛选 2.利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是 A. 刚果红能与纤维素形成红色复合物 B. 刚果红能与纤维二糖形成红色复合物 C. 刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物 D. 若培养基上产生了透明圈，则说明已筛　选出了纤维素分解菌 (三)、实验设计 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别培养基 挑选菌落 什么样的环境取样? ① 培养的目的? ②选择培养基的特点? 挑选什么样的菌落? ①鉴别培养基的特点? ②如何鉴别? ①分布环境 1、土壤取样： 富含纤维素的环境中 操作步骤 生物与环境的互相依存关系，在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高 ②原因 ③实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等。 ④如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？ 将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm左右的土壤中。 2、选择培养 增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离所需要的微生物。 ①目的： ②制备选择培养基： 培养基成分分析 培养基组成 提供主要的营养物质 纤维素粉 5g 碳源 NaNO3 1g 氮源、无机盐 KCl 0.5g Na2HPO4·7H2O 1.2g KH2PO4 0.9g MgSO4 ·7H2O 0.5g 无机盐 酵母膏 0.5g 生长因子、碳源、氮源 水解酵素 0.5g 氮素、生长因子 溶解后，蒸馏水定容至1000mL 水 提示：自变量为培养基的种类，即普通培养基和选择培养基。可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照,或者将纤维素改为葡萄糖。 A、旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？ 是液体培养基，原因是配方中无凝固剂（琼脂） B、这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？ 有选择作用，本配方中纤维素作为主要碳源，只有能分解纤维素的微生物可以大量繁殖。 C、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用 说明：分析“纤维素分解菌的选择培养基配方”可知，该配方中的酵母膏也能够提供少量的碳源，因此其他微生物也能在该培养基中生长繁殖。只不过，由于酵母膏的含量极少，因此，只有以纤维素为碳源的微生物才能大量繁殖。 2、选择培养 增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离所需要的微生物。 ①目的： ②制备选择培养基： ③操作： 将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下振荡培养1～2天，直至培养液变浑浊。也可重复选择培养。 按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的菌液进行等比稀释101～107倍。 3.梯度稀释 101 102 103 104 105 106 4.将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养 基上