药敏质量控制.PPT

接种物制备 浊度标准： 0.5麦氏浓度标准，相当(1-2)×108个菌落形成单位(CFU)/ml。 接种物浓度过高，会导致某些β-内酰胺类药物耐药 校准方法 肉眼观察比浊：应在足够的光线下贴靠着有白色背景和对比黑线的比色卡比较接种管和0.5麦氏浓度标准管 BaSO4浊度标准管：625nm处的吸光度值为0.08-0.10，每次使用需要充分震荡，每个月更换 商品化的乳胶悬浮液：每次使用之前上下颠倒混匀，有效期内使用 光学浊度仪 接种物制备 细菌生长曲线 迟缓期：菌体增大，代谢活跃，为细菌的分裂增值合成、储备足够的酶、能量及中间代谢产物，1-4h 对数期：此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，抗菌素作用对该时期的细菌效果最佳,8-18h 稳定期：此期细菌形态、染色、生物活性可出现改变，并产生相应的代谢产物 衰亡期：生理代谢活动趋于停滞 接种物制备 制备方法 直接菌落悬浮法：最方便的方法。可用于大多数细菌。 从16-18h培养的琼脂平板（应选用非选择性培养基，如血平板）上挑取数个单个菌落 直接接种到肉汤或生理盐水制成菌悬液，调整菌悬液至0.5麦氏。 接种物制备 制备方法 生长法：无法用上述方法制备菌悬液的情况下选用。 从琼脂平板上选择3-5个形态相同的单个菌落，用接种环或无菌拭子将菌落转移至含有4-5ml合适的肉汤培养基的试管中，如胰蛋白酶大豆肉汤。在35℃孵育培养，直到达到或超过0.5麦氏浓度（通常2-6h）浊度。 用无菌生理盐水或肉汤调整新鲜生长的肉汤悬液的浊度到0.5麦氏浓度。 试验操作 接种平板： 调整好浊度的菌悬液最好在15min内将无菌棉签浸取，同时在管壁上出去棉签上多余的液体 用拭子划线整个琼脂表面，接种于表面干燥的MHA平板上，每次旋转平板约60°，以确保每次接种均匀分布，最后在琼脂平板的边缘涂抹一圈 盖子可半开3-5min，但不可超过15min，以便放置药敏纸片前，使琼脂吸收表面多余的水分 试验操作 放置纸片： 将预先设定好并已经平衡至温度的药敏纸片分置在已接种细菌的琼脂表面 每个纸片必须压下以确保与琼脂表面完全接触。无论是单独放置或使用纸片分配设备，纸片必须分布均匀，两纸片圆心的距离不少于24mm 最好在预期的产生小的抑菌环的纸片旁边放置产生大的抑菌环的纸片，以避免重叠区 纸片距离琼脂边缘的距离同样重要，如果太靠近边缘，抑菌环可能不完整，建议距离平板边缘15mm。 药敏纸片一旦与琼脂表面接触，就不可再移动 放置纸片后15min内倒置平板进行培养 试验操作 孵育温度：（35 ±2）℃ 孵育条件：除嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌和链球菌外，孵育不需要CO2 CO2浓度变化会显著改变一些药物的抑菌环大小 孵育时间：16-18h 测试 苯唑西林或万古霉素对葡萄球菌属，或万古霉素对肠球菌属的敏感性，孵育时间必须达到24h 细菌 接种物准备方法 接种培养基 纸片数量 培养温度(℃) 5%CO2 培养时间（小时） 100mm 150mm 一般需氧菌 直接菌落悬浮法，生长法 MHA 5 12 35±2 不需要 16-18 肺炎链球菌和其他链球菌 直接菌落悬浮法 5%羊血MHA 4 9 35±2，不超过37 需要 20-24 流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌 直接菌落悬浮法 含SR158因子的HTM 4 9 35±2 需要 16-18 脑膜炎奈瑟菌 直接菌落悬浮法 5%羊血MHA 2 5 35±2，不超过37 需要 20-24 淋病奈瑟菌 直接菌落悬浮法 GC琼脂基质+1%规定的生长添加物 4 9 36±1，不超过37 需要 16-18 平板结果判读 培养后的平板观察 细菌的涂布是否满意 接种是否正确 产生的抑菌环是否均匀为圆形 菌苔是否融合生长 如果可见单个菌落，说明接种量过稀，必须重复试验 平板结果判读 测量方法： 用肉眼判读，测量完全抑制区的直径，包括纸片的直径 采用游标卡或尺子在培养基的背面测量 将培养基放在一个黑色不反光的背景上，并用反射光观察 如使用血平板，应除去盖子并用反射光照射，在琼脂的上方测量抑菌环 抑菌圈直径阅读—游标卡尺 抑菌圈直径阅读—直尺 平板结果判读 测量直径 没有肉眼可见的明显的生长区即可认为抑菌圈边缘。只能在放大镜下观察到的细小菌落忽略不计。 在一个明显抑菌环内有分散的菌落生长时，应该从原始菌落移种后重新测试。如分散的菌落依然在抑菌环内生长，则应测量无菌落的抑菌环内径。 变形杆菌属细菌可迁徙生长到某种抗菌药物抑菌环内，忽略明显的抑菌环内薄纱样迁徙生长。 测量血平板上的抑菌环时，测量的是生长抑菌圈，而不是溶血抑制圈。 测量含甲氧苄啶和磺胺类药物的抑菌圈时，忽略少量生长，测量比较明显的边缘，以确定抑菌环的直径。 细菌 药敏纸片 孵育时间 观察结果 金黄色葡萄球菌 苯唑西林