食品仪器分析技术项目一紫外可见吸收光谱法.ppt

《食品仪器分析技术》 谢 昕 主编 大连理工大学出版社 项目一 紫外-可见吸收光谱法及应用 【知识目标】 1、掌握物质的吸收光谱曲线和光吸收定律； 2、认知紫外-可见分光光度计的基本结构和各部件的作用； 3、熟悉紫外-可见吸收光谱法的实验技术，包括溶剂的选 择、显色条件的选择、干扰的消除及测定条件的选择等； 4、熟悉紫外-可见吸收光谱法的定性定量方法； 5、了解紫外-可见吸收光谱法在食品分析中的原理及实验技 术。 项目一 紫外-可见吸收光谱法及应用 【技能目标】 1、能正确使用紫外-可见分光光度计以及相关玻璃仪器； 2、熟悉紫外-可见分光光度计的日常维护与保养； 3、能正确配制标准溶液、绘制吸收曲线和工作曲线； 4、能根据待测样品和实验室现有条件进行最佳实验条件的选 择，如显色剂用量、酸度、显色时间、干扰消除以及仪器 测定条件的选择； 5、能正确进行数据记录和处理； 6、能对食品项目进行定性和定量测定。 项目一 紫外-可见吸收光谱法及应用 一、光的基本特性 （一）光的波粒二象性 光的本质是电磁辐射，光的基本特性是波粒二象性。波动性和粒子性的关系可表示为： 电磁波频率越大，波长越小，能量就越大。 电磁波按频率（或波长）可分为多种波段。 图1-1 部分电磁波波谱 项目一 紫外-可见吸收光谱法及应用 （二）光的存在和相互作用 单色光，既单一频率（或波长）的光。不发生色散。 复合光，多种单色光混合而成的光称为复合光。 可见光是电磁波谱中人眼可以感知的部分。可见光的光波波长范围在400～780nm之间,波长小于400nm 的紫外线或波长大于780nm 的红外线均不能被人的眼睹感觉出。如图1-2所示列出了各种色光的近似波长范围。 　　 图1-2 色光的近似波长范围 项目一 紫外-可见吸收光谱法及应用 　　 实验证明，将两种适当颜色的光按照一定的强度比例混合，可以成为白光，那么这两种色光就称为互补色光。 图中处于对顶关系的两种颜色的光即为互补色光。例如黄色光和蓝色光互补，绿色光与红紫色光互补，橙色光与青色光互补等等。 项目一 紫外-可见吸收光谱法及应用 项目一 紫外-可见吸收光谱法及应用 例如：当一束白光通过KMnO4溶液时，该溶液中的离子或分子选择性地吸收了500～560nm的绿色光，而将其他的色光两两互补成白光而通过，只剩下红紫色光未被互补，所以KMnO4溶液呈现紫红色。 同样道理，K2CrO4溶液对可见光中的蓝色光有最大吸收，所以溶液呈蓝色的互补色光黄色。 可见物质的颜色是基于物质对光有选择性吸收的结果，而物质呈现的颜色则是被物质吸收光的互补色。 项目一 紫外-可见吸收光谱法及应用 三、物质的吸收光谱曲线 以不同波长的单色光作为入射光，测定某一溶液的吸光度。然后以入射光的不同波长为横坐标，各相应的吸光度为纵坐标作图，可得到溶液的吸收光谱曲线（简称吸收曲线） 。 吸收光谱曲线是物质的特征性曲线，它和分子结构有严格的对应关系故可作为定性分析的依据。不同的物质，分子的结构不同，其吸收光谱曲线也有其特殊形状。 在吸收曲线上有一高峰（称为吸收峰）。 光吸收程度最大处所对应的波长称为最大吸收波长（常以λmax表示）。在进行光度测定时，通常都是选取在λmax的波长处来测量，因为这时可得到最大的测量灵敏度。 不同物质的吸收曲线，其形状和最大吸收波长都各不相同。因此，可利用吸收曲线作为物质初步定性的依据。 不同浓度的溶液，其吸收曲线的形状相似，最大吸收波长也一样，所不同的是吸收峰峰高随浓度的增加而增高。 项目一 紫外-可见吸收光谱法及应用 项目一 紫外-可见吸收光谱法及应用 （一）透光度和吸光度 透光度，又称透射比或透光率，为透过光的强度It与入射光强度I0之比，用T表示，即 当入射光全部吸收时，It=0，T=0；当入射光全部透过时，It=I0，所以0≤T≤1。 项目一 紫外-可见吸收光谱法及应用 （二）朗伯-比耳定律 光被透明介质吸收的比例正比于光程中吸收光的分子的数目，而与入射光强度无关，这就是朗伯-比耳定律，是紫外-可见分光光度法进行定量分析的理论基础。用数学公式表示为： 式中，K为吸光系数，与