人教2003课标版 高中生物 选修1专题5课题2　多聚酶链式反应扩增DNA片段.pptVIP

* * 课题背景PCR技术是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，它能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。广泛用于遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和DNA序列测定。 DNA多聚酶链式反应扩增DNA片断 课题2 1.DNA的基本单位－ ① ② ③ ④ ⑤ 脱氧核苷酸 （脱氧核糖核酸） 五碳糖 磷酸基团 羟基 3，端 5，端 A T G C A T G C 5，端（含磷酸基团） 3，端（含羟基） 3，端 5，端 2. 脱氧核苷酸链的形成 3.DNA分子的双螺旋结构 ⑴DNA分子是由 的脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则 结构。 ⑵ 与 交替连结，排列在外侧，构成基本骨架； 排列在链的内侧。 ⑶两条链上的碱基通过 连结起来，形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律：即腺嘌呤一定与 配对， 一定同胞嘧啶配对。 双螺旋 两条反向平行 脱氧核糖 磷酸 碱基 氢键 胸腺嘧啶 鸟嘌呤 生物体内DNA分子复制的条件 解旋酶 打开DNA双链 DNA母链 提供DNA复制的模板 4种脱氧核苷酸 合成子链的原料 DNA聚合酶 引物 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 催化合成DNA子链 DNA聚合酶的特性 DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3’端延伸DNA链。因此，DNA复制需要引物。 小资料：引物是一小段DNA或RNA，它能与DNA母链的一段碱基序列互补配对。用于PCR的引物长度通常为20~30个核苷酸。 DNA的复制方向 3’ 5’ 5’ 3’ 因此，DNA的合成方向总是从子链的5，端向3，端延伸。 （一）PCR技术的概念 是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，它能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。 （二）PCR技术的应用 遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和DNA序列测定。 三、基础知识 解旋酶（打开DNA双链） DNA母链（模板） 4种脱氧核苷酸（合成子链原料） DNA聚合酶（催化子链合成） 引物（ RNA）（使DNA聚合酶能从引物3′端开始连接脱氧核苷酸） 自主阅读P59，并思考： 体外扩增DNA，需要怎样环境？ 变性（ 80-100℃ ） Taq聚合酶（耐高温） 20—30个核苷酸构成DNA DNA母链 4种脱氧核苷酸 缓冲溶液，控制温度 1. DNA 分子的热变性原理 DNA双链 单链 变性（加热80-100℃） 复性（缓慢冷却） 变性的目的： 复性的目的： 解开双链 有利于引物与两条单链结合 在80~100 ℃的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性 (三）PCR原理 PCR技术总结 利用DNA分子的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解旋与结合，从而完成体外DNA分子的扩增。 四种脱氧核苷酸、耐热的DNA聚合酶、引物、 DNA模板、缓冲溶液和控制温度的温控设备。 子链的5’端向 3’端延伸 具有特异、敏感、产率高、快速、 简便、重复性好、易自动化等突出。 5/ 3/ 3/ 5/ 5/ 3/ 引物Ⅰ 5/ 3/ 引物Ⅱ 变性95oC 复性55oC 延伸72oC 5/ 3/ 3/ 5/ （四）PCR的反应过程 5? 引物1 5? 引物2 第二次复制 第一次复制 5? 5? 5? 5? 5? 5? 模板DNA 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 经n次循环（复制）后，DNA的含量理论上可以扩大到 倍。 2n 每次循环分为： PCR的反应过程总结 变性 ——复性——延伸 ② DNA聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。 ①从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸 PCR的反应结果 模拟PCR扩增DNA 二、 PCR反应的实验操作 1、PCR仪 （一）设备及用具 2、微量离心管 一种薄壁塑料管，总容积为0.5ml 3、微量移液器 用于定量转移PCR配方中的液体，其上的一次性吸液枪头用一次更换一次。 能够自动调控温度的仪器 （二） PCR的操作步骤 （1）按配方将所需试剂摆放在实验桌上（准备） （2）用微量移液器按配方在微量离心管中依次加入各组分（移液） （3）盖严离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁（混合） （4）将微量离心管放在离心机上离心约10s （离心） （5）将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循环程序（反应） （一）理论上DNA扩增数