第十章酶的非水相催化.pptVIP

Chapter 10 Enzymatic catalysis in Non-aqueous system 酶的非水相催化 Contents of chapter 10 苯乙酸复合物模型中活性位点示意图 图 1.5 苯乙酸复合物模型中活性位点示意图 Scheme 1.5 Environment of the active site in the phenylacetic acid complex. （Jing, H. J. Mol. Catal. B-Enzym., 2000, (11):45-53.） The phenylacetic acid ligand is shown as a ball and stick representation, with the important residues in the binding site highlighted as liquorice. The mesh represents a solvent-accessibility surface for the protein calculated using a 1-radius probe. PGSO结合活性位点的电子云密度图 图 1.6 PGSO结合活性位点的电子云密度图 Scheme 1.6 Stereoview of the electron density map of PGSO bound in the active site of WT-PGSO. （Ren, L.G. J. Mol. Catal. B-Enzym., 2002, (18):3-11） 酶活性丧失的可能原因： 反向微团体系中，微团效应使某些酶活性增加 超活性：凡是高于水溶液中所得酶活性值的活性称为超活性（Super-activity）。 认为：超活性是由围绕在酶分子外面的表面活性剂这一外壳之较大刚性所引起。 超活性产生机理 有机相生物印迹酶 有机相生物印迹酶 酶在含有其配体的缓冲液中，肽链与配体之间的氢键等相互作用使酶的构象改变，这种新构象除去配体后在无水有机溶剂中仍可保持，并且酶通过氢键能特异地结合该配体，这种方法叫生物印迹。 利用酶与配体的相互作用，诱导、改变酶的构象，制备具有结合该配体及其类似物能力的新酶称为生物印迹酶。 有机相生物印迹酶 pH记忆：有机溶剂中的酶能够保持它冷冻干燥前或沉淀前所在缓冲液中的pH时的状态 应用：控制有机相中酶催化的最适pH 10.1.3 反应体系中水对酶催化反应的影响 一．必需水 二．酶的选择 三．溶剂及反应体系的选择 四．pH选择和离子强度的影响 反应体系中水对酶催化反应的影响 酶都溶于水，只有在一定量的水存在的条件下，酶分子才能进行催化反应。所以酶在有机介质中进行催化反应时，水是不可缺少的成分之一。有机介质中的水含量多少对酶的空间构象、酶的催化活性、酶的稳定性、酶的催化反应速度等都有密切关系，水还与酶催化作用的底物和反应产物的溶解度有关。 酶分子只有在空间构象完整的状态下，才具有催化功能。在无水的条件下，酶的空间构象被破坏，酶将变性失活。故此，酶分子需要一层水化层，以维持其完整的空间构象。维持酶分子完整的空间构象所必需的最低水量称为必需水（essential water）。 有机介质中水的含量对酶催化反应速度有显著影响。存在最适水含量。 必需水 概念： 紧紧吸附在酶分子表面，维持酶催化活性所必需的最少量水。 干燥的酶水合过程： （1） 与酶分子表面带电基团结合达到0-0.07g/g（水/酶） （2） 与表面的极性基团结合(0.07-0.25g/g) （3） 凝聚到表面相互作用较弱的部位（0.25~0.38g/g） （4） 酶分子表面完全水化，被一层水分子覆盖。 影响酶反应体系中必需水含量的因素 a．不同酶需水量不同 b. 同一种酶在不同有机溶剂中需水量不同；溶剂疏水性越强，需水量越少 胰脂肪酶活性与含水量的关系 表征必需水作用的参数---热力学水活度 即在一定温度和压力下，反应体系中的水蒸汽压与相同条件下纯水的蒸气压之比。该参数直接反应酶分子上水分的多少，与体系中水含量及所用溶剂无关。 10.1.4 有机溶剂对酶催化反应的影响 常用的有机溶剂有辛烷，正己烷，苯，吡啶，季丁醇，丙醇，乙腈，已酯，二氯甲烷等。 在水溶液中，酶分子均一地溶解于水溶液中，可以较好地保持其完整的空间结构。在有机溶剂中，酶分子不能直接溶解，而是悬浮在溶剂中进行催化反应。根据酶分子的特性和有机溶剂的特性的不同，保持其空间结构完整性的情况也有所差别。 极性较强的有机溶剂，如甲醇，乙醇等，会夺取酶分子的结合水，影响酶分子微环境的水化层，从而降低酶的催化活性,甚至引起酶的变性失活