第四讲：酶的分离与纯化.pptVIP

一、酶的浓缩 浓缩是从低浓度酶液中除去部分的水或其他溶剂而使之成为高浓度溶液的过程。 抽提液(或发酵液)中酶浓度一般都很低，所以在进行纯化前往往须先予以浓缩，通过浓缩可以提高浓度、缩小体积，同时酶和蛋白质在浓缩溶液中的稳定性也较高。 常用的浓缩方法： 蒸发、超滤、凝胶过滤、沉淀法、渗透 二、酶的结晶 结晶是溶质以晶体形式从溶液中析出的过程。 酶在结晶之前必须经过纯化达到一定的纯度，通常酶的纯度应当在50％以上才能进行结晶。总的趋势是酶的纯度越高，越容易进行结晶。但是浓度过高时，会形成许多小晶核，结晶小，不易长大。有时为了进一步提高晶体的纯度，可以进行重结晶操作。 结晶方法： 盐析结晶法、有机溶剂结晶法、透析平衡结晶法、等电点结晶法 三、酶的干燥 真空干燥 冷冻干燥 喷雾干燥 气流干燥 吸附干燥 6、酶制剂的类型 (1)液体酶制剂 (2)固体粗酶制剂 (3)纯酶制剂 (4)固定化酶制剂 作业? 名词解释： 盐溶、盐析、硫酸铵饱和度、亲和纯化技术 简答题： 1、简要说明酶的分离纯化一般程序。 2、简述酶分离纯化的基本原则。 3、简述酶分离纯化方法的分类及其原理。 ★酶的用途与纯度要求 用途 纯度 医疗用途、活体研究等 要求极高纯度(99％) x射线结晶、物理化学性质研究等 高纯度(95％～99％) N末端测序、生产抗原等 一般纯度(95％) ★酶蛋白