第十一章基因工程讲义.pptVIP

第十一章 基因工程 人工接头连接 SV40 病毒的基因组是共价封闭环状双链DNA，长5．2kb。基因组在功能上分为早、晚期转录两个区域。 pCAT－basic plasmid在SV40的调节片段上游插入一个氯霉素乙酸基转移酶（chloramphenicol acetylfransferase， CAT） 11.4获取目的基因的方法 11.4.1鸟枪法 在基因组DNA文库中筛选出目的基因 鸟枪克隆法在基因组DNA文库中筛选到的目的基因，与染色体中的天然基因是一样的，含有内含子，在结构基因两端的连接区还有转录调控序列片段，即调节基因。这样的基因可供基因表达的调控分析。因为有内含子的存在，这样获得的结构基因不宜在原核宿主组织中表达。 11.4.2化学合成基因 将核着酸或寡核苷酸片段，一个一个地或一片段一片段地缩合起来，成为一个一个基因的核苷酸片段 。 11.4.3聚合酶链式反应 polymerase chain reaction， PCR优点很多，具有快速、灵敏、简便，特异等特点。 PCR对 DNA模板的质量和数量要求比其他实验方法低得多 但PCR也有缺点：扩增DNA的长度一般不超过 2kb， Taq DNA聚合酶在合成作用时也会发生错误，出错率0．25％，费用比较昂贵。 11.5 DNA体外重组与基因转移 11.5.1体外重组