自微乳化系统对细胞紧密连接蛋白的影响.pdfVIP

· 30· 药学学报 ActaPharmaceuticaSinica2006，41(1)：30—35 自微乳化系统对细胞紧密连接蛋 白的影响 沙先谊 ，方晓玲 (复旦大学 药学院，上海 200032) 摘要：目的 从分子细胞水平考察正、负电荷 自微乳化系统对细胞紧密连接蛋白复合体的影响。方法 建立了 模拟小肠上皮细胞结构的Caco．2细胞模型；测定对跨膜电阻和细胞间转运物质甘露醇转运评价制剂对细胞完整性 的影响。采用免疫荧光法评价两种 自微乳化系统不同稀释倍数对细胞紧密连接蛋白ZO·1和细胞骨架肌动蛋白 (actin)的影响。结果 负电荷 自微乳化系统在不同稀释倍数对跨膜电阻都无显著性影响。正电荷处方在考察的3 种稀释倍数显著性降低了跨膜电阻(P0．05)。细胞单分子层经正电荷 自微乳制剂处理2h，再经过48h培养，较高 稀释倍数跨膜电阻能够完全恢复；50倍稀释的处方不能完全恢复 (81．3％)。两种制剂在不同稀释倍数都能显著提 高甘露醇的渗透系数 (2．9～64．6倍)(P0．05)，作用与 自微乳稀释倍数具有相关性。免疫荧光结果表明，经制剂 处理后 ，影响了actin和ZO．1细胞分布，呈现不连续性。正电荷处方 由于静 电吸引，可能对细胞膜产生压力 ，比负电 荷处方更能影响actin的分布。对细胞紧密连接影响具有制剂稀释倍数的依赖性。结论 自微乳化系统能够提高甘 露醇的细胞间转运。通过影响actin和 ZO．1的细胞膜分布的作用机制打开细胞紧密连接。 关键词：自微乳化系统；Caco-2细胞；口服吸收；细胞紧密连接 中图分类号：R943 文献标识码：A 文章编号：0513—4870(2oo6)ol一0030—06 Effectofself-microemulsifyingsystem oncelltightjunctions SHA Xian—yi ．FANG Xiao—ling (CollegeofPharmacy，FudanUniversity，Shanghai200032，China) Abstract：Aim To study the effect of negatively charged and positively charged self- microemulsifyingsystems(SMES)onthecellulartightjunctioncomplexwastobeinvestigatedat moleculra cellleve1．Methods Human intestinalepithelialCaco．2 cellmodelwasestablished．Effectof formulationson thetransepithelialelectrical resistance (TEER)andpemr eabilityoftheparacellular transportmarkermannitolweremeasured toevaluatethecellintegrity．Changesinsubcellularlocalization ofthe tight iunction protein zona occludens 1 (ZO．1) and cytoskeleton protein actin by immunofluorescencewerealsoassessedaftertreatmentoftwoSMESsindifferentdilutions．Results The TEER ofcellmonolayerswasnotmarkedlyaffectedbynegativelychargedSMESindifferentdilutions．The positivelychargedSMEScouldsignificantlydecreasetheTEER (P0．05)inthreedilutions．Thefull recoveryofTEERwasfoundafterthetreatmentoflowerdi