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细胞遗传学实验技术标准操作规程(SOP) 外周血培养及染色体的识别 白血病骨髓及外周血染色体 外周血细胞脆性位点检测技术 人羊水细胞培养收获操作程序 11 绒毛细胞培养和染色体分析 13 \o Current Document 高分辨染色体操作方法和识别 15 \o Current Document GII式显带法 21 \o Current Document N式显带法 21 R (反式)显带法 23 姐妹染色单体互换(SCE)技术 23 荧光原位杂交操作程序 25 阻1细胞遗传学实验试剂配制标准操作规程(SOP) 27 天平称量操作规程 27 药匙处理操作规程 27 PBS配制规程 28 胰酶配制规程 28 TOC \o 1-5 \h \z \o Current Document 培养基配制规程 29 IN HCL配制规程 29 IN NaOH配制规程 29 外周血培养及染色体的识别 原理： 外周血小的淋巴细胞儿乎都是处在G。期或G期，一般情况下是不分裂的。当在培养基 中加入植物血凝素（Phytohaemagglutinin PHA）时，这种小淋巴细胞受到刺激后转化为淋 巴母细胞，并开始进行有丝分裂。经过短期培养后，用秋水仙素处理就可获得大量中期分裂 相的细胞，制片后可以清楚地对染色体进行观察与分析。 外周血培养与收获操作步骤： 2. 1采血：用20:1肝素（0. 4%）温润无菌注射器抽取外周血5ml （注意:消毒时需脱碘）。 2.2.种血：将注射器搓捏，使血样混匀，在无菌条件下，用7号针头垂直种血0.3ml 土抗 凝血（成年男子28滴，成年女子30滴左右，儿童32滴）至外周血培养基内。 2. 3.培养：将培养瓶放入37°C恒温箱屮培养68-72小时，注意第二观察培养液有无凝血、 溶血或长菌的现象，可每天培养液摇一摇，以便细胞可获得充分的营养，但一般情况下可不 摇。 2. 4.制片过程： 2.4.1.加秋水仙素：在培养完成前2-3小时，加入浓度为20ug/ml的秋水仙素2-3滴（7 号针头竖滴）后，继续培养2-3小时。 4. 2.离心：将培养液用吸管吸至离心管中（100ml离心管）2000转/分X 10分钟（Beckman 离心机）。 4. 3.低渗液处理：弃上清，加入已预温至37°C的0. 075mol/L氯化钾溶液约6-8ml,用吸 管充分打匀，放入37°C水浴箱中，温育30分钟。 2. 4. 4.预固定：即在离心管中加入现配的预温至37°C的甲醇、冰醋酸固定液（3:1） lrnl 左右，轻轻混匀。 4. 5.再次离心：2000转/分X 10分钟。 2. 4. 6.第一次固定：弃上清，加入现配的预温至37°C的新配固定液约6-8ml,轻轻混匀， 然后2000转/分离心10分钟。 2.4.7.第二次固定与第一次固定相同。 2.4.制片：弃上清，用固定液将沉淀调成细胞悬液（一般不宜太浓）在冰片上滴片，一 般高度为30cm±,每张片上滴2滴。 烤片： 显带：先将玻片放在预温至37°C的0. 025%胰酶溶液中（PII二7. 2-7. 4）消化1 30”左 右，每次的作用时间并不完全相同。可先试一张片子，再根据显带效果调整胰酚作用时间， 再放在预温至37°C的0. 85%NaCl溶液中漂洗两次，在预温至37°C的Giemsa溶液中染色10 分钟，白来水冲洗干净，用吹风机吹干后，即可阅片。 各号染色体的识别：各号染色体的界标和带型特征 A组染色体：包括「3号染色体，其长度最长的1号和3号染色体的着丝粒约在1/2处, 2号染色体的着丝粒约在3/8处。 1号染色体：着丝粒和次缢痕染色深。 短臂一一近侧段和中段各有一条深带，其中段深带稍宽，在处理较好的标本上，远侧段 可显出3?4条淡染的深带。此臂分为3区，近侧的深带为2区1号带，屮段深带为3区1 号带。 长借一一次缢痕紧贴着丝粒，染色浓。其远侧为一宽的浅带，中段和远侧段各有两条深 带，以中段第2深带染色较浓，中段两条深帯稍靠近。此臂分为4个区，次缢痕远侧的浅带 为2区1号带，中段第二深带为3区1号带，远侧段第三深带为4区1号带。 2号染色体： 短臂一一可见4条深带，中等的两条深带稍靠近。此臂分为两个区，中段第2、3深带 之间的浅带为2区1号带， 长臂一一可见6?7条深带，此臂分为3个区，第2和第3深带之I、可的浅带为2区1号带, 第4和第5深带之间为3区1号带。 3号染色体：着丝粒染色浓。 在短臂和长臂的中段各有一条明显宽阔的浅带，是该染色体的特征。 短臂 般在近侧段可见两条深带，远侧段可见3条深带，其屮远侧段近端部的一条 较窄，且着色较淡，这是区别3号染色体短臂的显著特征。此臂分为2个区，中段浅带为2 区1号带。 长臂一一一般在近侧段和远侧段各有一条较宽的深带