第十二章毛细管电泳法.ppt

* 12　高效毛细管电泳 12.1　基本概念 电泳：一个“自由”带电粒子在一定介质中在电场作用下的迁移 淌度：μep 表述物质电泳特性的参数，与粒子电荷、质量、半径、介质等有关 电渗： μeo由于粘滞阻力的存在，离子的电泳会带动溶剂同向运动。正负离子当量数相同时，溶剂受到大小相等方向相反的作用力，因此通常观测不到溶剂的运动。若设法使某种离子不运动，则作用于溶剂的力便失去了平衡，溶剂发生单向流动，这种流动称电渗。 　　 　　在不考虑相互作用的前提下，粒子在毛细管介质中的运动速度是泳流速度和渗流速度的矢量和。一般情况下，电渗流速度是电泳流速度的5-7倍，混合物中所有的组份随电渗流朝一个方向迁移。 式中　E：场强 　　 μeo电泳淌度 　　 μep电渗淌度 12.2　原理 电渗流方向：高电位 低电位 正溶质离子所受的力：电场力 + 电渗力 负溶质离子所受的力：电场力 ? 电渗力 中性分子所受的力：电渗力 　　 柱效：N＝5.54（tR /W1/2)2　 tR、W1/2取同一单位 　溶质迁移方向由电场力和电渗力的矢量和决定，一般来说，溶质迁移方向与电渗流同。 流出顺序：①正离子　②中性粒子　③负离子 高压 (+) Θ Θ Θ Θ Θ Θ Θ Θ Θ Θ ? Θ ? Θ ? Θ ? Θ ? Θ ? Θ ? Θ ? Θ 电渗流 (－) 地 电渗流 Θ Θ Θ Θ Θ Θ Θ Θ Θ Θ X－ X－ X－ X－ X－ （－） 高压 （＋） 地 12.3 　高效毛细管电泳　仪器装置图 清洗 记录 检测器 高压电源 毛细管 电解液 12.3.1　高压电源 0--30KV输出，恒压恒流，正负极性可调。Pt丝为电极? 12.3.2　进样系统 A、重力（高度差）进样 B、负压进样 C、电渗法进样? 12.3.3　分离系统 毛细管：I.D.：50?m-75?m，长30-100cm 12.3.4　检测系统 商品仪器：UV-VIS，加石英聚焦镜；激光荧光 实验室：质谱，电分析 ? 12.3.5　清洗系统 一般用负压法，NaOH洗液，减少吸附，清洗对重现性影响重大 12.4　分类 　常规区带电泳（CZE） 　胶束电动毛细管色谱（MECC） 　毛细管离子分析 SO3－ SO3－ SO3－ SO3－ SO3－ SO3－ 12.4.1　常规区带电泳（CZE） 电解质缓冲液，正高压 分离阳离子和大分子阴离子 12.4.2　胶束电动毛细管色谱（MECC） 　　揉合了毛细管电泳和液相分配色谱的原理，将表面活性剂加到电解液中，溶质分子进入体系后在胶束相和水相之间进行分配，不同的溶质分子因电泳速度和分配系数的不同而分离。 *