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羟自由基测定试剂盒使用说明 货号：LA1950 规格：50管/48样 产品内容： 试剂一：3%H2O2标准品贮备液0.5mL×1支，4℃保存3个月。 0.03%标准品应用液的配置：3%H2O2标准品贮备液：双蒸水 1：99稀释，现用现配。 试剂二：底物贮备液1mL×1支，4℃保存3个月。 底物应用液的配制： 如果您的样本为抑制羟自由基，即测定管吸光度比对照管吸光度低，则底物反应液的配制： 底物贮备液：双蒸水 1： 99稀释，现用现配。 如果您的样本为产生羟自由基，即测定管吸光度比对照管吸光度高，则底物反应液的配制： 底物贮备液：双蒸水 1：299稀释，现用现配。 试剂三：甲液贮备液2mL×1支，4℃保存3个月。用时用双蒸水稀释至1：9稀释成应用液。 乙液7mL×2支，4℃保存3个月。 试剂三应用液的配制：甲液应用液与乙液等比列混合，按需配置，剩余的4℃保存。 试剂四：液体10mL×1瓶，4℃保存3个月。用时加双蒸水稀释至100mL制备应用液，4℃保 存。若有结晶，则放置37℃水浴至全部溶解后再稀释。 试剂五：液体30mL×1瓶，避光4℃保存3个月。 试剂六：液体30mL×1瓶，避光4℃保存3个月。 试剂七：分析纯的冰乙酸自备。 显色剂的配制：试剂四应用液：试剂五：试剂六：冰乙酸 8:3:3:2，现用现配。 抑制羟自由基的物质如：血清 （浆）、各种组织匀浆液、口服液等 产生羟自由基的物质如：中性白细胞、某些药物、部分植物等。 产品简介： · Fenton反应是最常见的产生羟自由基的化学反应，H2O2的量和Fenton反应产生的OH量 · 成正比，当给予电子受体后，用griess试剂显色，形成红色物质，其呈色与OH 的多少成 正比列关系。 操作步骤： 以上配制好的应用液，先在37℃水浴中温育3min，一下操作在37℃水浴中进行。 空白管 标准管 对照管 测定管 双蒸水 （mL） 0.4 0.2 0.2 0.03% H2O2标准应用液 （mL） 0.2 底物应用液 （mL） 0.2 0.2 样本 （mL） 0.2 试剂三应用液 （mL） 0.4 0.4 0.4 0.4 混匀，37℃反应 1min （准确以秒表计时），从加完试剂三开始到1min结束，立即加入显色剂终 止反应，一次只能做一个管子。 显色剂 2 2 2 2 混匀，室温放置20min，波长550nm，1cm光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。 参考取样量：血清 （浆）样本用生理盐水20倍稀释后取0.2mL做检测；如果您有精确微量 移液器，可直接取0.010mL血清 （浆），再加0.190mL生理盐水。组织匀浆上清，取0.2mL 检测。具体取样量根据您自己做的预实验确定。 计算： 1、 血清计算公式： 定义：规定每毫升血清 （浆）在37℃下反应 1分钟，使反应体系中H2O2浓度降低1mmol/L 为一个抑制羟自由基能力单位。 抑制羟自由基能力 （U/