Tim-3对人JurkatT细胞NFAT信号通路的调控.PDFVIP

免疫学杂志 2019年1月 第35卷 第1期 IMMUNOLOGICALJOURNAL Vol.35 No.1 Jan.2019 ·77 · ·论 著· [文章编号]1000-8861（2019）01-0077-07；[DOI]10.13431/ki.immunol.j Tim-3对人JurkatT细胞NFAT信号通路的调控 △ * 吴 培，刘 军 ，张 放，王柏秋 [摘 要] 目的利用基因过表达技术来研究关键免疫检查点Tim-3对人T淋巴细胞NFAT信号通路的调控作用。方法将 NFAT-RE-Nluc、Tim-3基因编码序列制备成相应的慢病毒质粒，通过FugeneHD转染或者慢病毒介导的基因过表达技术，将 NFAT-RE-Nluc和Tim-3基因编码序列导入到JurkatT细胞中，通过萤光素酶报告基因检测系统检测细胞中的荧光信号强度。结 果Tim-3和NFAT-RE-Nluc成功在人T淋巴细胞中表达，并且Tim-3成功定位到细胞膜上。Tim-3能够直接激活人T淋巴细胞 的NFAT信号通路，诱导NFAT-RE-Nluc荧光素酶的表达。同时在JurkatT细胞中，Tim-3也能够增强CD3抗体激活NFAT信号 通路，诱导CD69的表达以及IL-2分泌的能力。结论成功构建了稳定表达Tim-3及NFAT-RE-Nluc报告基因的NFAT-RE- NlucTim-3细胞株，为深入研究Tim-3与其配体Galectin-9或CEACAM1之间的相互作用，及筛选阻断Tim-3-Galectin-9- CEACAM1的更有效的新型免疫检查点药物提供了重要的基础。 [关键词]Tim-3；NFAT-RE-Nluc；免疫检查点；基因过表达；慢病毒 [中图分类号]Q81 [文献标识码]A Tim-3regulatesNFATsignalinginhumanJurkatTcells 1,2,△ 1,△ 1 1,* WUPei ,LIUJun ,ZHANGFang,WANGBaiqiu 1.DepartmentofOncologyandEnzyme,HDBiosciencesCo.,Ltd.,Shanghai201201,China;2.SchoolofLifeScience, FudanUniversity,Shanghai200433,China *CorrespondingAuthor:WANGBaiqiu,E-mail:wangbaiqiu@ △Theseauthorscontributedequallytothisworkandsharefirstauthorship [Abstract] ThisstudywasperformedtoevaluatethefunctionofthecriticalimmunecheckpointTim-3 in activatingtheNFATsignalingpathwayinhumanJurkatTcellsbyusinggeneoverexpressiontechnology.Lentivirus vectorsexpressingNFAT-RE-NlucandTim-3wereconstructedrespectively,andco-transfectedintoJurkatTcells usingFugeneHDtransfectionreagentsorco-infectionofLentivirus.NFATsignalingactivationwasdetectedby usingNFAT-RE-Nlucluciferasereportersystem.DatashowedthatTim-3andNFAT-RE-Nlucwereco-expressed intheJurkatTcellssuccessfully,andtheTim-3waslocatedatcellmembraneasconfirmedbyFACSassessment. Anti-CD3couldsignificantlyactivatedtheNFATsignalingpathway,theexpressionofCD69andthesecretionofIL- 2,whichwerefurtherenhancedb