实验八重组转化子的快速鉴定概要.pptxVIP

实验八、重组转化子的快速鉴定 掌握快速鉴定重组转化子的方法 一、实验目的 二、实验原理 本鉴定方法是用碱性裂解液把转化子菌体裂解，然后直接用琼脂糖凝胶分离，通过比较白色和蓝色转化子质粒的迁移率，鉴定出重组转化子。 三、实验材料 菌落PCR检测增殖的菌落 该质粒载体用的是pUC的复制子，拷贝数能达到500-700个。 四、仪器设备 五、实验用具 微波炉 电泳仪 微型电泳槽 紫外透射检测仪 凝胶成像仪 移液器 吸管头若干 加样板 96孔培养板 牙签 六、试剂 七、实验步骤 1、用牙签从转化选择平板选取几十个白色和几个蓝色菌落，殖在LB平板上（添加Amp），37℃倒置过夜培养。 2、在96孔平板每孔加入20 ul 10mM EDTA。 3、用牙签挑取少量菌体（不能太少，也不能太多），悬浮于各孔中（其中1-2孔是蓝色菌落作为对照），将平板接触旋涡器几秒钟。 4 、加入20 ul裂解液，将平板接触旋涡器几秒钟，静置5分钟。 5 、将等量的1M KCl和载样缓冲液混合，各孔中加入6 ul，将平板接触旋涡器几秒钟。 6 、按蓝色菌落，白色菌落......最后蓝色菌落的顺序，各取20 ul点样。 7 、1.2%的琼脂糖凝胶电泳后观察。与蓝色菌落质粒迁移率比较，可判别