体外培养细胞的细胞生物学特点.pptVIP

* * PolyHEMA 35----------0.0035 um 高浓度（厚） 低浓度（薄）细胞 圆 扁 （附着最差）获得细胞构型（模型） 不同伸展程度的细胞PolyHEMA 细胞厚 厚（21~22 um）（伸展差）（10+-2）薄 薄（2 um） （伸展好）（46+-13） PolyHEMA Cell Height (um) H3 (C.P.M).  1.00 22 7+-5  4 x 10-2 15 50+-5  4 x 10-3 6 250+-15 细胞悬浮在培养液中时，近似球体形状 当接触坚硬平面 即铺展于底物上，扁平状 与底物形成很多接触点 伸展过程 (1)开始阶段 开始附着铺开 细胞附着于底物 球形的细胞，下方表面与底物接触成扁 但尚未形成新的伪足 伸展分几个阶段 (2) 放射状铺展阶段在球形细胞体的周围形成很多伪足隆起伪足形状 主要 柱形丝状: 直径0.2-0.5um 长10-20 扁平片状: 厚0.1-0.5 宽2-5 尚有: 小泡状叶状: 直径1-2 开始时: 絲状多 以后 片状增加 许多伪足 形成薄的胞质小片牢固贴于底物 胞体中央部分 扁 整亇细胞扁平 (3) 极化阶段 细胞最后伸展附着的情况 实验：用多种细胞， 以显微操作及缩时电影 定位细胞附着于玻璃和聚苯乙烯情况 检测--显微针头— 结果：附着规律 附着点： 附着规律几乎未见于细胞的中央区 (如不在核之下) 总在边缘，边缘”摆动”活动的部位 凸的边缘 在薄的边缘 附着区： 约为细胞下面表面的15-35％ 附着、伸展的条件 底物 细胞能在很多固体表面附着 最终铺展的程度，取决于底物的性质 影响因素： 活性物质(贴附、伸展因子):血清、培养液中，  或细胞分泌的生物活性物质被底物吸附后可利于细胞的铺展 细胞借助这些分子,可附着于各种”非特异性”的底物上 如Fn，胶原，聚赖氨酸 机械，物理因素 接触抑制和密度依赖性 接触抑制和密度依赖性生长仰制   运动的接触抑制 密度依赖性生长仰制 增殖的密度抑制 实验 方法：3T3细胞，接种105于6cm培养皿， 5d细胞计数 于加入10％、20％、30％牛血清的  培养液中，结果： 增殖的密度抑制 结果： ①10％血清： 20hr后铺满 (汇合confluent) 以后至5d 细胞数不再增加 (细胞 数约106／6cm皿) 密度抑制 30%血清： 以后经常换液至5d，  细胞密度继续增加  (可达6xl06／6cm皿) 说明: 密度抑制---铺满后 不再增殖(分裂停止) 血清可降低密度抑制 只加入于3T3停止生  长的培养液中 细胞不生长 ○ 当再加入血清 细胞又生长 说明血清可消除密度抑制 (2)转化细胞的密度抑制降低 ①用此培养液 3T3细胞不再分裂增殖 ②当再加入10％血清， 3T3细胞可再增殖 表示血清可消除密度抑制 ③但当用此培养液， 于转化的3T3细胞 (SV3T3) 却生长良好 表示转化细胞密度