第11节 植物细胞代谢产物制备i.pptVIP

什么是初级和次级代谢产物？ 初级代谢产物 是指微生物通过代谢活动所产生的、自身生长和繁殖所必需的物质，如氨基酸、核苷酸、多糖、脂类、维生素等。通过初级代谢，能使营养物转化为结构物质、具生理活性物质或为生长提供能量，因此初级代谢产物，通常都是机体生存必不可少的物质，只要在这些物质的合成过程的某个环节上发生障碍，轻则引起生长停止，重则导致机体发生突变或死亡，是一种基本代谢类型。 次级代谢产物 是指生物生长到一定阶段才产生的化学结构十分复杂、对该生物无明显生理功能，或并非是该生物生长和繁殖所必需的物质，如抗生素、毒素、激素、色素等。不同种类的生物所产生的次级代谢产物不相同，它们可能积累在细胞内，也可能排到外环境中。 什么是植物细胞培养?与组织培养的区别? 植物细胞培养(plant cell culture):是指在离体条件下对植物单个细胞或小的细胞团进行培养并使其增殖，获得大量细胞群体的一种技术。 1979年国际组织培养协会专业术语委员会建议： 组织培养：从机体内取出组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外进行培养，使之生存或生长成组织。 细胞培养：动植物细胞在体外条件下的存活或生长，此时细胞不再形成组织。 （2）机械法 第一种方法：用刀片刮叶片 细胞平板培养 概念：将制备好的单细胞悬浮液，按照一定的细胞密度，接种在1mm左右的薄层固体培养基上进行培养，称之为平板培养。 主要技术要点：? 单细胞的分离：一般采用酶分离法，小细胞团不能超过6个细胞，因此过滤时网筛的网眼要选择合适。? 单细胞悬浮液的制备：分离的单细胞经培养基洗涤2次以后，调整密度为5×105/ml。 植板：将1份已调整好密度的单细胞悬浮液与4份35℃的固体培养基充分混合均匀，然后均匀的平铺于培养皿中，其厚度为1-2mm。待植板后的培养基完全凝固后，用石蜡或封口膜将培养皿封严以防污染，在25℃黑暗条件下培养3周即可长出肉眼可见的细胞团。 微室培养 概念：人工制造一个小室，将单细胞培养在小室中的少量培养基上，使其分裂增殖形成细胞团的方法，称微室培养。 　3）液体浅层静置培养法 　　指将一定密度的悬浮细胞放在培养皿中形成一浅薄层，封口静止培养。 　该方法优点：易于补加新鲜培养基，便于镜检。 （三）继代培养 1.固体培养 平板培养法是经常采用的一 种固体培养方式，将一定量细胞接种到或 混合到装有一薄层固体培养基（含琼脂 Agar）的培养皿内进行培养。类似于微生 物细胞的平板培养，具体步骤包括：单细 胞悬浮液的制备、计数、调节细胞密度、 培养基选择、浇平板、接种培养。 采用液体培养基进行细胞培 2.液体培养 养。 （四）植物细胞悬浮培养 细胞悬浮培养（Cell suspension culture） 是将细胞接种于液体培养基中并保持良好的 分散状态的培养方式。 植物细胞悬浮培养主要在摇床和生物反应器 中进行，培养方法与微生物类似。 优点： 1.可以增加细胞与培养液的接触，促进营养 的吸收。 2.保证良好的混合状态，从而获得良好的气 体传递效果。 3.可以达到较高的细胞浓度，容易放大培养。 振荡培养箱 悬浮培养的生物反应器 一般所说的生物反应器是指细胞培养生物反 应器，是为细胞生长提供合适的化学与物理 环境并能检测控制细胞生长的装置。 一般都有三部分组成：反应罐、控制系统、 检测分析系统。 问题4.与传统微生物发酵罐相比，植物 细胞培养的生物反应器有什么特点？ 植物细胞培养的特殊要求 植物细胞培养反应器最初大多采用微生物反应器。由于植物细胞与 微生物细胞形态结构不同，植物细胞较微生物细胞大，对剪切力耐 受性差，而且对氧的要求相对微生物要低得多，因此微生物反应器 并不完全适合于植物细胞生长与生产。 植物细胞培养具有周期长、细胞抗剪切能力弱、易团聚等特点。同 时，植物细胞规模培养的目的是生产天然产物，而这些天然产物均 为细胞次生代谢物。所以，植物细胞培养反应器的设计，不仅要考 虑有利于细胞生长，同时还要考虑有利于产物的积累和分离。总体 上讲，适合植物细胞的反应器应该具有适宜的氧传递、良好的流动 性和较低的剪切力。 光照的提供：外光源、内光源，透明材料。 结构尽量简单。 机械搅拌式生物反应器（Stirred tank rioreactor） 一般由罐体、搅拌桨、控温系统、气路、 传感器等组成。依靠搅拌器使液体产生轴 向流动和径向流动。该生物反应器的优点 是搅拌充分，供氧能力和混合效果较好。 搅拌罐中产生的剪切力大，容易损伤细 胞，直接影响细胞的生长和代谢，特别对 于次级产物生成影响极大。需要对搅拌罐 进行改进，包括改变搅拌形式、叶轮结构 与类型、空气分