磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒说明书.docVIP

磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒 MagBeads Plasmid DNA Mini Extraction Kit 【目 录 号】PDE-5005、PDE-5010、PDE-5030、PDE-5100 【运输条件】2~25℃； 【保存条件】组分①、③、④于2~8℃保存；组分⑦于-20℃保存；其它组分室温保存； 【试剂盒组成】 Kit Component 试剂盒组成 PDE-5005 （50T） PDE-5010 （100T） PDE-5030 （300T） PDE-5100 （100T） ① PDE-Buffer 1 菌体悬浮液 12mL 22mL 65mL 220mL ② PDE-Buffer 2 菌体裂解液 12mL 22mL 65mL 220mL ③ PDE-Buffer 3 质粒复性液 20mL 40mL 110mL 400mL ④ Magnetic Beads 磁珠悬浮液 3mL 6mL 16mL 55mL ⑤ Wash Buffer 清洗液 30mL 60mL 160mL 520mL ⑥ Elute Buffer 洗脱液 10mL 20mL 30mL 60mL ⑦ RNase A Solution RNase A酶溶液 30μL 60μL 165μL 600μL 【注意事项】 使用前将RNase A溶液（组分⑦）全部加入菌体悬浮液（组分①）中，4℃保存备用； 使用前检查菌体裂解液（组分②）是否出现浑浊，如有请置于37℃水浴中温浴至澄清； 实验前质粒复性液（组分③）需提前置于4℃冷却充分； 菌体裂解液（组分②）和质粒复性液（组分③）使用后应请立即盖紧盖子； 磁珠悬浮液（组分④）严禁冻融和离心，以免磁珠受到损害，使用前务必充分混匀； 所有离心步骤均为室温下进行，其中加入质粒复性液（组分③）后低温离心效果更佳； RNase A溶液（组分⑦）长期不使用于-20℃保存，融化后4℃保存，并尽快使用； 质粒DNA抽提得量与细菌的培养浓度、宿主菌、质粒拷贝数等因素有关； 本操作指南经公司反复验证，使用前请仔细阅读并按指南建议操作。 【产品简介】 本试剂盒可应用于对小量菌液进行质粒DNA抽提。试剂盒采用高性能纳米磁珠和特殊缓冲液系统。磁珠表面修饰有特殊化学基团，在一定条件下对质粒DNA具有极强的亲和力，当条件改变时可以可逆的释放质粒DNA，从而达到分离纯化质粒DNA的效果。整个操作过程简便、快速。本产品可最大限度的去除蛋白质等杂质，保证提取所得质粒DNA的纯度，所得质粒DNA产物可直接应用于酶切、测序、文库筛选、连接和转化等各种下游分子生物学实验。 本试剂盒可在EP管中进行手动法操作、在96孔圆孔板中实现手动法高通量操作（单人同时操作1~6块96孔板，可同步实现96~576份样本抽提工作）、或者与各种自动化核酸提取仪配合使用实现自动化高通量操作。 【试剂盒说明】 样本类型 样本量 核酸得量 单样本提取时间 6×96孔板提取时间 菌液 1.0~5.0mL 10~20μg 40min 60min 【自备仪器、耗材和试剂】 手动普通版 金属浴、涡旋混合仪、离心机、EP管、EP管用磁力架、80%乙醇。 手动高通量版 涡旋混合仪、吸水纸、烘箱或电风扇、水浴锅、96孔圆孔板（孔体积2.2mL）、96孔圆孔板专用磁力架、96孔板离心机、48孔尖底板（孔体积4mL）、48孔板用硅胶垫（或PCR板封板膜）、80%乙醇。 仪器自动版 英芮诚ETP-400核酸提取仪、涡旋混合仪、离心机、EP管、96孔圆孔板、80%乙醇。 【手动普通版操作步骤】 菌体收集 将适量菌体(1.0~5.0mL)转移至EP管中，室温、12000rpm离心2min，吸弃上清液。 菌体悬浮 向EP管中加入200μL菌体悬浮液，摇晃将菌体沉淀彻底悬浮。 菌体裂解 向EP管中加入200μL菌体裂解液，上下轻柔颠倒EP管约2min使菌体充分裂解，裂解液应变为基本澄清。 注：如果菌液量较大，可延长裂解时间至约4min，但不宜超过4min，否则质粒难以复性。 质粒复性 向EP管中加入350μL质粒复性液（已4℃冷却充分），上下轻柔颠倒EP管使质粒复性（最佳状态为内容物呈蛋花状）。将EP管于4℃、12000rpm离心10min，将上清液转移到新的EP管中，并做好记录。 核酸结合 向转入上清液的EP管中加入50μL吹打均匀的磁珠悬浮液，涡旋振荡5min，确保磁珠与溶液充分混匀。 磁性分离 将EP管置于磁力架上静置约20s至磁珠吸附完全。如EP管内盖有磁珠残夜，保持EP管于磁力架上，整体颠倒两次使磁珠吸附完全，然后彻底吸弃上清液，期间避免接触磁珠。 清洗 1）向EP管中加入500μL清洗液，从磁力架上取下，上下用力摇动3~5次（或使用移液器吹打）使磁珠分散均匀，然后涡旋震荡1min，参考步骤6进行