新型纳米载体固定化酶的研究.pptVIP

一、酶纳米载体的种类 磁性纳米粒子用于固定化酶的研究 ——磁性粒子是一类新型的固定化酶载体材料，具有生物相容性好和固定化酶易从反应混合物中回收等优点。无机磁性纳米粒子应用较多的是 。 此类载体的核心由磁性纳米颗粒组成，外面包被有一层有机或无机分子的壳，通过这种表面修饰的方法可以在载体表面引入多种反应性功能基团（如羟基、氨基、巯基等），因此该载体可以连接酶、抗体、核酸等生物分子，已被广泛地用于生物学和医学研究。 表面修饰的材料和方法 二、纳米载体固定酶的方法 吸附法： 将制备好的纳米颗粒或其他纳米载体直接加入含有一定浓度酶液的缓冲溶液，在合适条件下纳米载体可以通过静电作用或与氨基酸残基侧链基团之间的特异性结合而将酶分子牢固吸附到纳米载体表面, 如金特异性地结合氨基酸残基侧链的巯基和氨基; 镍离子特异性地结合蛋白质末端的多聚组氨酸“尾巴”。 【优点】操作简单, 是目前应用得较为广泛的一种固定化方法, 尤其是用于各种酶传感器的制备。用纳米材料制备的各种酶传感器, 能显著提高生物传感器的检测极限, 增强检测的特异性, 缩短电极响应时间。 包埋法 将酶与聚合物单体在一定的条件下混合, 聚合物单体之间发生聚合交联的过程，就可以将酶分子固定到高分子聚合物中; 或者是将酶分子包裹在多孔的单分子膜中, 形成微胶囊型纳米颗粒。 【优点】包埋效率高；固定化稳定性好，酶分子与纳米载体不易解体分离,；对酶结构的完整性也没有显著的影响,；酶的半衰期长达143 天 共价结合法： 酶和纳米载体以共价键的形式结合在一起, 这种方法需要酶和载体都具有氨基、羧基或羟基等官能团。 1）直接结合法 纳米载体必须携带有能与氨基酸侧链基团发生反应的相应基团, 如C60的各种衍生物就可以直接固定各种酶蛋白; 2）间接结合法 间接法是先在纳米载体颗粒的表面包被上一层携带有活性基团的聚合，或者先将纳米颗粒用具有活性基团的材料胶囊化, 然后再与酶分子共价连接。 【优点】能有效地防止酶与载体的解离, 从而防止酶的丢失; 并且有助于防止酶的变性, 增强其稳定性。 【缺点】反应过程中酶的活性位点被隐藏或限制了活性位点与底物的结合, 将不可避免地导致酶活性一定程度的降低。 三、纳米载体的特点及纳米载体固定对酶性质的影响 （一）特点： 表面积大、体积小； 表面自由能高； 易于将酶与底物和产物分离； 提高酶的生物相容性、免疫活性和稳定性。 （二）对酶性质的影响： 1.对酶活力和稳定性的影响 ~与传统材料相比，纳米结构能使酶在不同体系长期保持活性稳定, 2.对酶特异性的影响 ~纳米材料巨大的比表面积、充足的表面功能化基团, 尤其是单层受保护的纳米粒子, 会使酶活力提高很多。 Eg：在空间位阻和静电的共同作用下, 结合在表面用烷基硫醇- 四( 乙二醇) 乙酸单分子膜功能化的纳米金颗粒表面的??- 胰凝乳蛋白酶,表现出了很明显的化学选择性: 对携带正电荷的底物表现出很强的亲和性, 有较高的催化活力; 对携带负电荷的底物仅表现很低的亲和力和催化活力; 对中性底物的亲和力和催化能力居中。 3.对酶结构和功能的影响 ~一般来说, 纳米材料固定化对酶结构和功能基本上没有太大的影响, 都能够保持其完整性; 有些可以通过在纳米材料表面偶联一些特异性的配体, 调控酶的结构和功能 四、纳米酶催化剂的优点及纳米技术在酶催化应用中的进展 （二）、纳米技术在酶催化应用中的进展 3.纳米技术能够实现油-水界面催化 酶应存在于相界面才能高效地实现催化; 而一般酶往往是溶于水相或油相。 Ⅰ.利用疏水性高分子材料(如聚苯乙烯)修饰水溶性酶, 通过合理设计聚苯乙烯的分子量, 可以获得两亲性的酶, 该两亲性酶能自组装于油-水界面, 减少反应传质阻力，提高界面自组装酶的催化活性。 Ⅱ.疏水性纳米材料的固相界面能使酶在油-水界面更加稳定。 Ⅰ.将两种酶与辅酶共同固定在纳米孔内, 辅酶在两种酶之间穿梭, 一种酶与辅酶的还原态共催化生成产物1, 另一种酶则与辅酶的氧化态共催化生成产物2 。这种设计不仅实现了辅酶再生, 而且可以同时获得两种重要产品。由于纳米孔尺度小, 辅酶依靠热振动就能在两种酶之间穿梭。同时, 纳米孔还能使酶稳定 Ⅱ.多酶体系也可以利用纳米颗粒来实现, 将分别固定了酶和辅酶的纳米颗粒混合, 依靠纳米颗粒的布朗运动来实现酶和辅酶的共催化以及辅酶再生。 五、纳米载体固定化酶的应用与待解决的问题 新型纳米载体固定化酶的研究 纳米颗粒是有机或无机材料构成的亚微米基团（尺寸分布在1-100nm之间） 什么是纳米材料？ ？ 自然界中的酶至少有70万种, 而实现工业应用的仅上百种。因此, 在开发利用酶资源方面, 可以说才刚刚起步, 潜力巨大, 迫切需要克服影响酶工业化应用的