检验技术离心机.pptVIP

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* (二)驱动电机 多为串激式,包括定子和转子两部分 * (三)转速调节系统 1.交流变频调速将逐步取代直流调速 2.多功能、自动化和微机控制 * 三、制冷和温度控制 1.制冷系统 高超速离心机和一部分低速大容量制备用离心机配置 2.温度控制 转头室内的温度由测温元件完成,如蒸汽压力式温度表、半导体热敏电阻和红外线遥感元件。测温元件感测到的信号,通过放大器放大来控制制冷系统 * 四、离心机的主要类型 根据用途:分析型、制备型、分析-制备型 根据操作方式:间歇、连续和半连续 根据分离形式:沉降式和过滤式 根据离心机转速:分常速(低速)、高速和超速 根据结构特点:管式、吊篮式、转鼓式和碟式 根据是否冷冻:高速冷冻离心机、大容量冷冻离心机 * 制备性离心机: 用于分离各种生物材料,每次分离的样品容量比较大 分析性离心机: 一般都带有光学系统,主要用于研究纯的生物大分子和颗粒的理化性质 * 1. 制备性离心机: 根据转速   常速(低速)   高速        超速   rpm       5000 10000~25000 >25000 RCF 6000×g 89000×g > 89000×g 适用分离对象   细胞   微生物菌体、大细胞器  亚细胞器、病毒和 和细胞碎片等 生物大分子等 * 2. 分析性离心机: 都是超速离心机 使用了特殊设计的转头和光学检测系统,以便连续地监视物质在一个离心场中的沉降过程,从而确定其物理性质 在分析离心杯中物质沉降情况时,在重颗粒和轻颗粒之间形成的界面就像一个折射的透镜,结果在检测系统的照相底板上产生了一个“峰”,由于沉降不断进行,界面向前推进,因此峰也移动,从峰移动的速度可以计算出样品颗粒的沉降速度。 * 第三节 离心方法 一、分离离心法 二、分析离心法 三、普通低速离心机使用的注意事项 * 离心方法分类: 差速离心法 密度梯度离心方法 速率区带离心法 等密度区带离心法 分离离心方法 分析离心方法:监测沉降过程,研究生物大分子的沉降 特性和结构 * 一、分离离心法 又称制备离心法,包括差速离心法和密度梯度离心法 * 1.差速离心法 是以不同离心力来分离不同质(沉降系数)的微粒的一种动力学方法,因不同的粒子在同一离心条件的离心力场中沉降速度不同,若不断增加相对离心力,一个非均匀混合液内的大小、形状不同的粒子将分步沉淀。 原理: 速度逐渐提高,样品按大小先后沉淀 * 用差速离心法分离已破碎的细胞各组份 特点及应用: 特点:分辨率不高;离心次数多,操作繁杂;产品的纯度和回收率都达不到理论值。 应用:用于组织匀浆液中细胞器和病毒的分离及其他分离手段之前的粗制品提取。如破碎细胞各组分(细胞核、细胞膜碎片、线粒体、溶酶体、核糖体)的沉淀分离。 * 2.密度梯度离心法 原理: 将样品加在惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡,在一定的离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同区带的分离方法。 分类:依据离心分离原理。 (连续密度梯度离心法) (不连续密度梯度离心法) * (1)速率区带离心法 原理: 在离心前于离心管内先装入密度梯度介质(如蔗糖),把待分离的样品铺在梯度液的顶部、离心管底部或梯度层中间,与梯度液一起离心。靠近旋转轴处的介质密度最小,离旋转轴最远处的介质密度最大,但最大介质密度必须小于样品中粒子的最小密度。 这种方法是根据分离的粒子在梯度液中沉降速度的不同,使具有不同沉降速度的粒子处于不同的密度梯度层内分成一系列区带,达到彼此分离的目的。 * 梯度液(聚蔗糖(ficoll)、硅溶胶(pereoll)及蔗糖(sucrose))在离心过程中以及离心完毕后,取样时起着支持介质和稳定剂的作用,避免因机械振动而引起已分层的粒子再混合。 * 特点及应用: 特点:分辨力高,但离心时间要严格控制。 应用: 速率区带离心法是一种动力学方法,适用于测定生物大分子颗粒的沉降系数。 速率区带离心是一种不完全的沉降,沉降受物质本身大小的影响较大,一般应用于物质大小相异而密度相同的情况。 * (2)等密度区

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