从水代谢调节途径探讨甘遂和甘草的配伍关系-中西医结合临床专业毕业论文.docx

3．反药组合甘遂．甘草抗腹水作用机制的网络药理学分析 3．反药组合甘遂．甘草抗腹水作用机制的网络药理学分析 ．28 (四)讨论 ．33 1．运用网络药理学的研究策略是中医药研究的重要方向之一 33 2．中医药网络药理学研究的常用方法手段 ．34 3．基于网络药理学研究策略探讨反药组合甘遂．甘草配伍关系及相关机制 一42 (五)结论 45 三、基于抗利尿激素分泌调控网络的反药组合甘遂．甘草配伍机制的研究46 (一)前言 一46 (二)材料与方法 ．48 1．药物准备 48 2．实验动物 一48 3．实验试剂 ： 48 4．实验仪器 50 5．实验方法 ．．5 l 6．指标检测方法 ．．5l 7．统计方法 一58 (三)实验结果 ．59 1．反药组合甘遂．甘草配伍对H22肝癌腹水小鼠药效学验证结果 ．59 2．反药组合甘j罄甘草配伍对I-122肝癌腹水小鼠肝肾功能的影响 ．60 3．反药组合甘遂．甘草配伍对H22肝癌腹水小鼠ADRBl／PIK3CO／AVPR2／AQP2信号的影响 ．64 (四)讨论 ．78 1．甘遂泻水、甘草潴水，从水代谢途径入手有利于探讨两药的配伍关系 78 2．反药组合甘遂．甘草配伍对肝肾功能的影响 ．80 3．反药组合甘遂．甘草配伍机制的研究 ．8l (五)结论 ．89 四、结论 90 参考文献 91 iiii[谢 ． ．．102 文献综述 。103 作者简历 ．．113 nI 万方数据 中文摘要1．研究目的 中文摘要 1．研究目的 本研究从妨害治疗角度切入，采用均匀设计法明确甘遂．甘草配伍对甘遂泻水作用 的影响，同时整合网络药理学预测和实验验证，从水代谢调节途径探索相关作用机制。 2．研究方法 2．1均匀设计法研究反药组合甘遂．甘草的配伍关系 ①通过H22肝癌腹水模型小鼠确定甘遂抗肝癌腹水作用的有效剂量范围； ②根据均匀设计2因素7水平的原则，观察7个不同剂量配比的甘遂．甘草对肝癌 腹水模型小鼠的药效学影响； ⑨通过MATLAB7．8软件对均匀设计结果进行多元逐步回归分析，筛选反药组合甘 遂．甘草产生拮抗或协同的剂量配比范围。 2．2网络药理学研究策略预测反药组合甘遂．甘草配伍机制 ①基于药物所含化合物结构相似性原理，利用Therapeutic Targets Database中的Drug similarity search工具，获得与甘遂、甘草所含化学成分具有相似化学结构的药物分子， 分别预测甘遂、甘草的候选作用靶标； ②基于蛋白质相互作用(Protein-protein interaction,PPI)信息构建甘遂．甘草抗腹水作 用的“药物．疾病．靶标”相互作用分子网络，并通过网络拓扑特征分析和分子对接技术、 及候选靶标的化学结构信息生物学功能挖掘，筛选并获得与甘遂．甘草抗腹水作用密切 相关的靶标。 2．3反药组合甘遂．甘草配伍机制的实验研究 (DICR雄性小鼠按2．1制各H22肝癌腹水模型小鼠，将小鼠按体重随机分为正常组、 模型组、甘遂．甘草协同组、甘遂一甘草拮抗组、单独甘遂大剂量组、单独甘遂小剂量组、 速尿组，造模24h后开始灌胃给药，每天1次，共7天； ②实验结束后脱颈椎处死小鼠，检测体重、腹围、腹水量等药效学指标；酶法检测 血清肝功能、肾功能；取肝脏、肾脏组织进行常规HE病理切片观察； ③ELISA法检测血清、腹水中B一1肾上腺素能受体(Beta-1 aarenergic receptor, ADRBl)、磷脂酰肌醇(．3)激酶丫亚基(Phosphatidylinositol 4，5一bisphosphate 3-kinase catalytic subunit gamma isoform，PIK3CG)、血管加压素V2受体(Arginine V如opressiIl receptor 2，AVPR2)、水通道蛋白一2(Aquaporin 2，AQP2)水平；免疫组织化学、蛋白质印 TV 万方数据 迹法和实时荧光定量聚合酶链式反应法检测小鼠肾脏的ADRBl、PIK3CG、AVPR2、 迹法和实时荧光定量聚合酶链式反应法检测小鼠肾脏的ADRBl、PIK3CG、AVPR2、 AQP2的蛋白和mRNA的表达。 3．研究结果 3．1均匀设计法研究反药组合甘遂一甘草的配伍关系：甘草剂量／1．03 g／1(g且甘草： 甘遂的剂量比≥1．11：1时，甘草可显著拮抗甘遂的抗腹水作用；甘遂剂量0．70班g且 甘草：甘遂的剂量比≤O．39：1时，甘草对甘遂的抗腹水产生协同作用； 3．2网络药理学研究策略预测反药组合甘遂．甘草配伍机制：ADRBl和PIK．3CG分 别为甘遂和甘草的候选靶标，且均与己知抗腹水靶标AVPR2具直接相互作用关系，反 药组合甘草．甘遂在抗肝癌腹水中的配伍机制，可能与调节抗利尿激素分泌调控