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基因工程 一、概念 又叫基因重组技术，或DNA拼接技术，是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品 二、基本工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） ⑴来源：主要从原核生物分离纯化 ⑵作用：识别双链DNA中某种特定的核苷酸序列，并且使特定部位的磷酸二酯键断开 ⑶结果：产生黏性末端或平末端 2.“分子缝合针”——DNA连接酶 ⑴E.coli-DNA连接酶 ①来源：大肠杆菌 ②作用：将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来 ⑵T4-DNA连接酶 ①来源：T4噬菌体 ②作用：既可连接黏性末端又可连接平末端，但连接平末端的效率比较低 3.“分子运输车”——载体 ⑴常用载体：质粒 ⑵必备条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存 ②具有一至多个限制酶切位点，供外源DNA片段插入 ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择 ⑶其他载体：噬菌体、动植物病毒 三、操作步骤 1.目的基因的获取 ⑴目的基因：主要指编码蛋白质的结构基因 ⑵方法：①从基因文库中获取目的基因②利用PCR技术扩增目的基因③用化学方法直接人工合成 基因文库 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，成为基因文库。如果基因文库中包含了一种生物所有的基因，这种基因文库就叫做基因组文库；如果只包含了一种生物的一部分基因，这种基因文库叫做部分基因文库，如cDNA文库。 PCR技术 是聚合酶链式反应的缩写，利用DNA双链复制的原理，将基因的核苷酸序列不断地加以复制，使其数量呈指数方式增加。 利用PCR技术获取目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。扩增的过程是：目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在DNA聚合酶作用下进行延伸，如此重复循环多次。 2.基因表达载体的构建（核心） ⑴目的：是目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用 ⑵组成： 启动子+目的基因+终止子+标记基因启动子是一段有特殊结构的DNA片 段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质。 终止子 终止子相当于一盏红色信号灯，使转录在所需要的地方停止下来。终止子位于基因的尾端，也是一段有特殊结构的DNA短片段。 标记基因 标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来，如抗生素基因就可以作为这种基因。 3.将目的基因导入受体细胞 ⑴将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法：使目的基因整合到受体细胞染色体DNA上 ②基因枪法 ③花粉管通道法 ⑵将目的基因导入动物细胞：显微注射法 ⑶将目的基因导入微生物细胞 　　受体细胞 　　　↓Ca2+ 　　感受态细胞 　　　↓含重组表达载体DNA分子的缓冲液 　　感受态细胞吸收DNA分子 4.目的基因的检测与鉴定：分子杂交技术检测转基因生物的染色体DNA是否插入了 目的基因（DNA—DNA杂交） ↓ 检测目的基因是否转录出了mRNA(DNA—RNA杂交） ↓ 检测目的基因是否翻译成蛋白质（抗原—抗体杂交） 四、基因工程的应用 1.植物基因工程 ⑴抗虫转基因植物——减轻农药对环境的污染⑵抗病转基因植物⑶抗逆转基因植物 ⑷利用转基因改良植物的品质 2.动物基因工程 ⑴提高动物生长速度⑵改善畜产品的品质⑶用转基因动物生产药物 ⑷用转基因动物作器官移植的供体⑸基因工程药品的生产 3.基因治疗 ⑴概念：把正常基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用 ⑵方法：①体外基因治疗②体内基因治疗 五、蛋白质工程 1.概念 以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求 2.崛起的缘由 基因工程只能生产自然界中已经存在的蛋白质。这些天然蛋白质是生物在长期进化过程中形成的，它们的结构和功能符合特定物种生存的需要，却不一定完全符合人类生产和生活的需要。 3.蛋白质工程的原理 ⑴目的：根据人们对蛋白质功能的特定需求，对蛋白质的结构进行分子设计 ⑵基本途径 预期蛋白质的功能→设计预期蛋白质的结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因） 细胞工程 一、植物细胞工程 1.基本技术⑴理论基础：细胞全能性⑵常用技术 植物组织培养 2.应用 1.植物繁殖新途径：微型繁殖（快速繁殖）作物脱毒制造人工种子 2.作物新品种的培育：单倍体育种突变体的利用 3.细胞产物的工厂化生产 二、动物细胞培养 1.概念：从动物机体中取出相关的组织