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高效液相色谱整体柱技术的进展 姓名:王汝斌 班级:研1304班 整体柱(monolithic column)又称整体固定相(monolithic stationary phase)、棒柱(rod)、连续床(continuous bed)等，它是由单体、交联引发剂、致孔剂的混合物在色谱柱管内通过原位聚合而成的连续整体多孔结构固定相。其可根据需要对整体材料的表面作相应的衍生化，是一种新型的用于分离分析或作为反应器的多孔介质。 近年来, 高效液相色谱整体柱作为一种新型色谱柱迅速发展起来。已有数家公司推出了商品化的整体柱, 例如无机硅骨架的整体柱Silica RODTM、Prep RODsTM和ChromolithTM有机聚合物整体柱CIMTM。 整体柱的优点包括:可以原位制备，省去制备填料和装柱，也可以同法制成聚合物颗粒后再装柱；聚合物易于制备，柱子的长度和直径在一定程度上不受限制；聚合反应混合物中的单体可以灵活选择以得到合适的基质和性质；易于在柱衍生化，以得到具有合适性质的色谱柱；通过控制聚合反应的条件可以优化孔的性状。 整体柱应用流程图: 用作整体柱分离介质的多孔高聚物必须考虑其表面的化学性质、对溶剂和溶质的保留、孔隙率、孔径分布和硬度这几方面的要求。整体柱可以用作高效液相色谱柱和毛细管电色谱柱。 整体柱 无机：主要是将硅氧化物直接烧结在柱内或者用溶胶-凝胶法在柱中反应得到。 有机：是有机聚合单体在柱管内原位聚合得到的。 2 整体柱材料与制备 2. 1 无机整体柱 近十几年发展起来的无机整体柱通常利用有机硅, 如四甲氧基硅烷和四乙氧基硅烷, 在醋酸水溶液中水解, 随后在制孔剂(如聚乙二醇)存在下制得具有孔洞结构的整体硅胶柱。它比传统的填充柱有更大的孔和更好的渗透性, 可以在较高的流速下保持较低的压力。 难点：整体材料在聚合过程中会收缩。因此， 在模具中先制得的整体硅胶柱要截成适当长度装到聚四氟乙烯的柱管中。为了保证柱子准直， 通常内径小于10mm, 柱长不超过15cm。聚四氟乙烯包裹的柱子可以耐受高达120 kg /cm2的压力。整体材料在模具中聚合时, 由于整个网状结构收缩, 得到流通孔径/骨架尺寸比为1. 2~ 1. 5, 而填充柱中该值为0. 25~ 0. 4。 整体硅胶材料和有机整体材料一样, 可通过化学修饰或改变原料(使用不同性质的聚合单体)获得不同用途的整体柱。整体硅胶基质表面的硅羟基是化学修饰的靶点。 2.2 有机聚合物整体柱制备过程： 丙烯酰胺类的整体材料 甲基丙烯酸酯类的整体材料 聚苯乙烯类的整体材料 有机聚合物整体柱 丙烯酰胺类的整体材料 聚丙烯酰胺体系是典型的水相聚合体系。其特点是：单体易溶于水；有良好的生物兼容性， 适合分离生物大分子； 柱中的凝胶颗粒上没有孔来增加传质，但其直径小，表面粗糙，所以表面积大, 结合位点多； 凝胶颗粒间靠共价键结合， 流动阻力小； 分离效果往往随流速的提高而提高。 甲基丙烯酸酯类的整体材料 聚甲基丙烯酸酯类整体柱的特点因酯部分的变化而不相同。若酯部分是烷基, 疏水程度可由甲基丙烯酸酯的比例和烷基链的长度来调整。酯部分含有环氧基团的整体柱易于衍生化。例如, 以甲基丙烯酸缩水甘油酯为单体的聚合物可容易地引入离子基团而制备离子交换色谱柱, 并且衍生化试剂的选择范围也可大大扩展。 聚苯乙烯类的整体材料： 聚苯乙烯体系用于离子交换树脂的制备已经发展得相当成熟, 优点是硬度高且性质稳定。聚(苯乙烯-二乙烯基苯)苯整体柱多用于分离蛋白质或核酸(单链和双链)。利所制的聚苯乙烯整体柱还发展了柱的沉淀-再溶色谱 ( “On-Column” Precipitation-Re dissolution Chromatography) , 并分离苯乙烯的寡聚物和高聚物。 3.1 整体材料的性质评价及性状控制： 整体材料主要参数 测定方法 孔径分布，孔隙率 压汞法测定，扫描电镜 比表面积 氮气吸附-解吸法 化学结构 红外光谱法，NMR 3. 2 孔径的控制 Frchet等认为多孔聚合物的形成过程与致孔剂、单体和生成的聚合物三者的极性有关；致孔剂与单体的极性接近, 才能作为单体的良溶剂。致孔剂极性与聚合物极性的差异越大, 相分离越早出现,则聚合物孔径越小。孔径的大小由聚合反应混合物中交联剂和致孔剂的比例、组成以及由反应温度和引发剂种类和浓度决定的反应速度等聚合反应的条件决定。因此改变混合物中交联剂的比例会改变聚合物的化学组成, 调整致孔剂的比例常被用来调整