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通道载玻片--受牙龈菌感染的Ca9-22细胞中IL-33免疫荧光染色实验
细胞的免疫荧光实验是一个基础的细胞实验，传统的方法是在培养板中放入预先处理好的盖玻片，待细胞贴壁后，使用镊子将盖玻片拿出再开始进行固定，染色等系列工作。为了简化这一工作，一系列底部适合直接成像的细胞耗材应运而生，如图：
日本的科研人员在研究细胞因子IL-33在Ca9-22细胞中免疫荧光染色试验时使用了一种通道载玻片。IL-33是一种在内皮细胞中常规表达的细胞因子，其参与调节了先天免疫细胞的Th2细胞因子介导的免疫应答。研究人员想研究增强IL-33表达的牙周内皮细胞中牙周菌Porphyromonasgingivalis所发挥的作用。研究人员使用牙周菌P.gingivalis刺激Ca9-22细胞，再测试其中IL-33的表达。
PorphyromonasgingivalisGingipain-DependentlyEnhancesIL-33ProductioninHumanGingivalEpithelialCells
H.Tada,T.Matsuyama,T.Nishioka,M.Hagiwara,Y.Kiyoura,H.ShimauchiandK.Matsushita
PloSone,2016,10.1371/journal.pone.0152794
一）实验材料：
1）Ca9-22细胞
2）牙周菌P.gingivalis50μg/ml
3）多聚甲醛溶液4%
4）BSA1%PBST溶液
5）藻红蛋白偶联的大鼠抗人IL-33抗体（clone,390412;RDSystems）
6）DAPI
8）六通道载玻片ibiTreat，德国ibidi公司，80606
图一：通道载玻片示意图。细胞的免疫荧光实验简化，并且节约试剂（单通道30μl），细胞分布及其均匀，成效效果好。
二）实验步骤
1）单通道铺入3×105Ca9-22细胞，37℃,5%CO2环境中孵育过夜待细胞贴壁。
2）使用无细胞培养基，轻轻冲洗通道，移除未贴壁细胞（图二）。
图二：冲洗换液方法，蓝色代表新的无细胞培养基
用50μg/ml牙周菌P.gingivalis，（MOI为0.13）加入通道中，刺激Ca9-22细胞4天
用4%的多聚甲醛固定15分钟
用1%BSA的PBST溶液封闭30分钟
使用0.5μg/ml的藻红蛋白偶联的大鼠抗人IL-33抗体4℃孵育1小时
DAPI孵育1分钟
用荧光显微镜观测数据。
实验结果
图三：牙周菌P.gingivalis增强牙周内皮细胞中IL-33的表达。用50μg/ml牙周菌P.gingivalis，刺激Ca9-22细胞后使IL-33（红色）表达有显著的提高。细胞核（蓝色）
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