可见分光光度法和紫外分光光度法教学指导.docVIP

PAGE 第十三章可见分光亮度法和紫外分光亮度法 首页 基本要求 重点难点 讲授学时 内容提要 1基本要求[TOP] 1.1掌握分光亮度法的基本原理，Lambert—Beer定律以及透光率、吸亮度、摩尔吸光系数等基本概念及相互关系。 1.2熟悉物质对光的选择性吸收，吸收光谱的意义；可见分光亮度法的测定方法—标准曲线法和标准对照法。 1.3了解光的基本性质，光的加和性；分光亮度计的基本构造；比吸光系数比较法、差示分光亮度法和双波长法的测定方法；提高测量灵敏度和准确度的方法；紫外分光亮度法的一般概念。 2重点难点[TOP] 2.1重点 分光亮度法原理－Lambert-Beer定律。 2.2难点 提高测量灵敏度和准确度的方法。 3讲授学时[TOP] 建议3学时 4内容提要[TOP]第一节第二节第三节第四节第五节 4.1第一节物质的吸收光谱 当光照射到某物质或某溶液时，只有光子的能量(h?)与被照射物质粒子的基态和激发态能量之差(?E)相等时，才能被吸收。不同物质的基态和激发态的能量差不同，选择吸收光子的能量也不同，即吸收的波长不同。光的能量与波长成反比，波长越短，能量越高。 有色溶液的颜色是它所选择吸收光的补色，吸收越多，则补色的颜色越深。比较溶液颜色的深度，实质上是比较溶液对光的吸收程度。 任何一种溶液对不同波长的光的吸收程度是不同的。以波长?为横坐标，吸亮度A为纵坐标作图，得到的曲线为吸收光谱。吸收光谱描述了物质对不同波长的光的吸收能力，吸亮度最大处的波长为最大吸收波长。不同的物质有不同的吸收光谱，最大吸收波长也不同，它可以对物质进行初步的定性分析。吸收光谱是分光亮度分析中选择测定波长的重要依据。通常选用最大吸收波长为测定波长，具有最高的灵敏度。 4.2第二节分光亮度法基本原理[TOP] 4.2.1透光率和吸亮度 当一束平行单色光照射到溶液时，若不考虑光的反射，则入射光强度I0，吸收光强度Ia，透射光强度为It之间的关系为 I0═Ia+It（13.1） 透射光的强度It与入射光强度I0之比称为透光率T表示 （13.2） 透光率的负对数称为吸亮度，用符号A表示。 （13.3） 4.2.2Lambert-Beer定律 Lambert和Beer研究了吸亮度A与液层厚度b和溶液浓度c之间的定量关系。得出吸亮度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比。这就是Lambert—Beer定律，是光吸收的基本定律。 A═kbc（13.4） k与被测物质性质、入射光波长、溶剂、溶液浓度及温度有关。 当b以cm，c以物质的量浓度(mol?L-1)为单位时，k称为摩尔吸光系数，以?表示，单位为L?mol-1?cm-1，Lambert—Beer定律可表示为 A═?bc(13.5) 若用质量浓度?(g?L-1)代替物质的量浓度c，则Lambert—Beer定律可表示为 A═ab?（13.6） 式中的a为质量吸光系数，单位为L?g-1?cm-1。 a和?可通过下式相互换算 ?═aMB（13.7） M表示被测物质的摩尔质量。 医药学上还常用比吸光系数来代替摩尔吸光系数。当溶液组成标度为10g?L-1时，可用表示，它与?和a的关系分别为： (13.8) (13.9) Lambert—Beer定律仅适用于单一波长的单色光。?、a或越大，表明溶液对入射光的吸收就越强，测定的灵敏度就越高。 4.3第三节可见分光亮度法[TOP] 4.3.1分光亮度计 分光亮度法所采用的仪器称为可见分光亮度计。基本部件及相互间的关系如下： 检测器指示器光源单色器吸收池 检测器 指示器 光源 单色器 吸收池 4.3.2定量分析方法 应用分光亮度法定量测定时，入射光一般选择?max的单色光，常用的定量分析方法有标准曲线法和标准比较法二种。 (一)标准曲线法 配制一系列浓度不同的标准溶液，在?max处分别测量它们的吸亮度。以标准溶液的浓度为横坐标，相应的吸亮度为纵坐标作图，得到一条标准曲线，然后在相同条件下测量待测溶液的吸亮度，从标准曲线上查得待测溶液的浓度。 (二)标准对照法 配制一个与被测溶液组成标度相近的标准溶液(浓度为cs)，测得吸亮度为As。然后在相同条件下测得被测溶液的吸亮度Ax，根据Lambert—Beer定律计算其试样溶液的浓度cx为： (13.10) 4.4第四节提高测量灵敏度和准确度的方法[TOP] 4.4.1分光亮度法的误差 分光亮度法的误差主要来源于溶液偏离Beer定律引起的误差、仪器误差和主观误差。 (一)仪器测定误差 仪器测定误差是由光电管的灵敏性差、光电流测量不准、光源不稳定及读数不准等因素引起的。 (二)溶液偏离Beer定律引起的误差 溶液偏离Beer定律引起的误差表现为A-c曲线的线性较差，常出现弯曲。产生这种情况的主要原因有 1.化学方面吸光物质不稳定，因浓度