蛋白质分离纯化基础技术培训20140429.pptxVIP

蛋白分离纯化基础知识;? 蛋白质的分离纯化是研究蛋白质结构、化学组成和生物功能的基础。蛋白质在自然界中存在于复杂的混合体系中，而且许多重要的蛋白质在细胞中的含量极低。 要把蛋白质从复杂的体系中分离出来，同时又要防止其组成、结构的改变和生物活性的丧失，显然是有相当难度的。;;培训内容;培训内容;预处理;破碎方法;超声破碎;渗透压破碎;离心;不同细胞结构分离所需的离心力;离心方法;离心;超滤;超滤;双水相系统：因两种水溶性聚合物的水溶液，或一种水溶性聚合物水溶液与盐溶液混合时的不相容性而形成有明显界面的两相系统;;各种类型的双水相体系;;选择双水相的原则;;;优点;缺点;培训内容;层析的概念;层析介质;层析前需要了解;常用层析技术;亲和层析;;;原理： 以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离。 通过静电相互作用而使带正电荷的样品结合到阳离子交换介质上，而带负电荷的介质则可结合到阴离子交换介质上，再采用改变盐浓度或者缓冲液的pH值的方法进行洗脱。 ; 影响因素：;经验;吸附层析造成的失活; 原理： 根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质和多肽等生物大分子的一种方法。 蛋白质和多肽等生物大分子的表面常常暴露着一些疏水性基团，称为疏水补丁，疏水补丁可以与疏水性层析介质发生