第七章-分子发光分析法知识讲稿.pptVIP

第七章 分子发光分析法;7.1 概述; 荧光法最主要的优点之一是灵敏度高。紫外吸收法的灵敏度为10-7 g/mL，而荧光法可达10-10~ 10--12 g/mL。 对于有机化合物，荧光法的选择性高于紫外吸收法。 因此，荧光法在生物化学、环境科学、医药学、食品分析、卫生检验、农林牧产品分析和科研领域中具有特殊的重要性。 分类;7.2.1 分子光谱的产生-----电子自旋的多重性;对同一物质，物质所处的多重态不同，性质明显不同 S态磁场中不分裂，抗磁性；T态分子磁场中分裂，顺磁性; 2 电子在不同的（单、多重）态间跃迁需换向，不易发生;;1. 振动驰豫 (vibrational level relaxation, VR);5. 分子荧光 (vibrational level relaxation, VR);1 荧光激发光谱固定发射波长λem ，扫描激发波长λex而获得的荧光强度If ------激发波长的关系曲线；反应了不同激发波长激发荧光的相对效率；;a) 单色器改变λem，同一荧光物质If～λex曲线形状不变，只是灵敏度有变化，即曲线高低变化；b) 理论上，λex(max)和 λabs (max) 相等，激发光谱和吸收光谱相同；;7.2.3 分子荧光的参数;1 荧光强度与浓度;什么分子产生荧光？ 强荧光分子都具有大的共轭π键以及供 电子取代基和刚性平面结构，什么分子不产生荧光？ 饱和化合物与只有孤立双键的化合物;（1）共轭π键体系 荧光最强，环越大，发光越强，发光峰红移程度越大 共轭环数相同的芳香族化合物，线性环结构的荧光波长比非线性长;（2）刚性平面结构 i) 强荧光分子多具有刚性平面结构：减少自身的振动，与溶剂分子或其他溶质的作用减少，较少碰撞几率；;（3）取代基效应 ★供电子取代基使荧光加强 基团：－NH2，－NHR，－NR2，－OH，－OR，－CN等 n电子云与芳环上的π电子轨道平行，形成了p ~ π共轭，扩大共轭体系。但是基团中的n电子转化为共盐后，它们的荧光均大为减弱。;★吸电子取代基使荧光减弱，磷光增强 基团：－COOH，－C＝O，－NO2，－SH及重氮基等。 n电子云并不与芳环上的π电子云共平面，不能构成 p~π共轭，荧光发射弱； 重原子效应：而芳环上取代卤素后系间窜跃较为强烈，相应荧光随卤数原子???的增加而减弱，磷光相应增强。;（4）电子跃迁类型 含O、N、S等杂原子的有机物如喹啉和芳酮类化合物含有非键电子n，电子跃迁多为n~π*型，系间窜跃强，荧光很弱或不发荧光； 不含含O、N、S原子的有机体多发生π ~ π *类型跃迁，荧光辐射强！;常见的猝灭类型 （1） 自猝灭： 荧光物质分子M*和它的基态M碰撞引起猝灭； 荧光物质的自吸收，S1激发态的分子发射的荧光被处于基态M的分子所吸收，使荧光强度降低。 荧光物质分子的缔合。某些荧光体分子处于基态时会形成二聚体或多聚体，或者激发态分子S1与基态分子M形成激发态二聚体1(M*M)。 ;（3） 转入三重态猝灭 经系间窜跃进入三重态的分子，多余的能量消耗在碰撞之中使荧光猝灭。 溴化物和碘化物由“重原子效应” ，促使荧光分子的激发单重态转入激发三 重态，导致荧光的猝灭； 氧分子也会增强使荧光物质系间窜跃，氧分子是荧光最常见的 猝灭剂。;4. 温度、酸度、溶剂和表面活性剂的影响;pH值改变会影响弱酸或弱碱的型体分布，进而影响荧光强度； 在荧光分析中一般都要较严格地控制溶液的pH值:;7.2.5 荧光定量分析法;（3）荧光猝灭法 对于静态猝灭：;（4）多组分混合物荧光分析法;c) 同一激发波长荧光光谱互相干扰，利用荧光强度的加和性，建立联立方程且求解： If 435/385 , If 480/385---------混合液在435和480nm出的荧光强度（测定）； K --------各纯物质的相对摩尔荧光强度（测定）； CT \ CP --------硫胺素和吡啶硫胺素的浓度（求出）。 利用工作站的软件;（5）荧光分析注意事项;上海CRT 970;1 荧光分析仪主要部件 由光源、单色器、样品池、检测器和记录装置五个部分组成。 （1）光源： 常见的有氙灯和高压汞灯;（3）样品池：四面透光的的方形石英池;荧光分析法的特点： 灵敏度高 荧光分析法的灵敏度比吸光分析法高2～4个数量级，检测限在0.1～0.001μg·mL－1之间； 选择性好 荧光分析法的光谱特征性强，而且有激发光谱和发射光谱。如果某几种物质的激发光谱相似，就可以从它们发射光谱的差异进行鉴别和分析；相反如果发射光谱相似，可以从它们激发光谱的差异进行鉴别和分析； 荧光法提供比较多的物理参数