实验八 亲和层析分离纯化蛋白质.ppt

（三个不连续性） 1、凝胶孔径的不连续性（2种孔径的凝胶） 2、缓冲液离子成分及pH值的不连续性（2种缓冲体系，3种pH）：浓缩胶，pH6.8，蛋白质分子的迁移率比Cl- 低，比Gly高。 3、电位梯度不连续性：快离子（ Cl- ）后面形成高电位梯度区，慢离子（Gly）前面形成低电位梯度区，高电位梯度和低电位梯度之间的地方，形成一个稳定而不断向阳极移动的界面，蛋白质分子在界面处浓缩成一个狭小的中间层。 浓缩效应 SDS试剂 1. 30%（W/V）凝胶：丙烯酰胺（Acr） 29.0 g，亚甲基双丙烯酰胺（Bis） 1.0 g，加水到100 mL。 2. 分离胶缓冲液（pH8.8，1.0 mol/L Tris-HCl）：三羟甲基氨基甲烷（Tris） 12.1 g，加约80 mL蒸馏水，用1.0 mol/L HCl调节pH到8.8，用蒸馏水稀释到100 mL。 3. 浓缩胶缓冲液（1.0 mol/L Tris-HCl，pH 6.8） Tris 12.1 g，加约60 mL蒸馏水，用1.0 mol/L HCl调节pH到6.8，加蒸馏水到100 mL。 4. 10.0 %（W/V）SDS 5. 10.0 %（W/V）过硫酸铵（现用现配） 6. 10X电极缓冲液（pH 8.3）：Tris 30.3 g，Gly 144.2 g，SDS 10.0 g，加水到1000 mL。（用时稀释