色谱分离技术完整课件.ppt

* 由塔板理论可得到：在色谱过程中色谱峰是要展宽的，展宽的宽度平方值和理论板高H成正比。即相达成“平衡”所需的距离H值越大，则色谱峰展宽也就越严重。反之，若理论板高H值越小。而就一定柱长而言，组分在两相间的“平衡”次数就越多，色谱柱的分离效率就越高，因此理论板高H值是衡量色谱柱效率的一个很好的指标。 塔板理论回答了影响色谱峰保留时间和峰宽度这二个重要问题，但它没有回答宽度也就是相应的理论板高究竟受哪些操作条件的影响。 * 　　理论塔板数越大，峰形越窄，柱效越高。 塔板高度表示单位柱长下的柱效。 塔板高度越小，表明柱效越高，理论塔板数越多。 * 1952年Lapidus等对填充柱色谱过程做了较详细的研究，指出色谱过程中引起组分宽度扩张的因素主要是： 1.沿柱流动方向的纵向扩散效应； 2.组分在两相间的平衡不能瞬时达成，即它在两相交换时传质速度是有限的。 非平衡速率理论 * 这就是著名的范底姆特方程。也可把Van Deemter方程描述为： * 与气相色谱不同，液相色谱有其特点，因而其速率理论的表述方式也有区别： 各项分别为：涡流扩散项、分子扩散项、传质阻力项（固定相、流动流动相和滞留流动相） * 传质速率控制理论 根据溶质从液相主体到吸附剂上吸附点的过程建立模型。 液膜传质扩散速率控制模型 吸附剂表面吸附速率控制模型 孔扩散速率控制模型 * 气相色谱 气相色谱法主要利用物质的沸点、极性及吸附性质的差异，以气体为流动相，以液体或固体为固定相从而达到分离混合物的色谱方法。 * 气相色谱法的特点 优点： 分离效率高、应用范围宽、分析速度快、样品用量少; 灵敏度高、分离和测定一次完成、自动化程度高. 缺点： 不适用于高沸点（450℃）、有生物活性的物质的分离测定 不适用于制备. * * 待测样品在高温的气化室气化后在惰性气体的带动下进入色谱柱，色谱柱内含有液体或固体固定相 每种组分都倾向于在流动相和固定相之间形成分配或吸附平衡。但由于载气是流动的，这种平衡实际上很难建立。 由于载气的流动，使样品组分在运动中进行反复多次的分配或吸附、解吸。 结果是在载气中分配浓度大的组分先流出色谱柱，而在固定相中分配浓度大的组分后流出色谱柱，进入检测器。 * 甲醇和乙醇混合样色谱图 * 高效液相色谱 高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。 它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。 * 高效色谱仪 * * 首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱，然后从控制器的出口流出。 当注入欲分离的样品时，流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检测器送出的信号记录下来，由此得到液相色谱图。 * 蔬菜、水果中农药残留 的检测 * 苯和丙酮混合样的色谱图 * 液相色谱的主要特点是： 分离效率高； 选择性好，适用于多种多元组分复杂混合物的分离； 应用范围广。从无机物到有机物，从天然物质到合成产物，从小分子到大分子，从一般化合物到生物活性物质等。 * 凝胶色谱 是以各种具有网状结构的凝胶颗粒为固定相，根据流动相中所含各种组分的分子大小不同而达到物质分离目的的一种色谱技术。 凝胶渗透色谱 凝胶过滤色谱 * 基本原理 大分子物质在凝胶颗粒间隙中运动 小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质 结果使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这种现象叫分子筛效应。 * 优点：操作方便、不会使物质变性、适用于不稳定的化合物、凝胶不用再生、可反复使用。 缺点：分离速度较慢。 * 分离过程 * 凝胶柱床总体积是各部分体积之和。 溶质分子在流动相和固定相之间的分配系数与被分离物质分子大小及凝胶颗粒内孔隙大小有关。Kd 值在0~1之间。 可通过实验求出Kd ，进而判断溶质的行为模式。 * 凝胶色谱介质 理想的凝胶过滤介质具有高物理强度及化学稳定性，能够耐受高温高压和强酸强碱，具有高化学惰性，内孔径分布范围窄，珠粒颗粒大小均一度高。 凝胶粒度的大小对分离效果有直接的影响。 目前，常用的有葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等。 * 凝胶色谱的应用 脱盐 去除小分子物质 相对分子质量测定 一定范围内，蛋白质的分配系数与相对分子质量的对数呈线性关系。 分离纯化