第2章植物组织培养的基本技术与设施.pptVIP

（二） 外植体灭菌的一般步骤 3. 将适当浓度的消毒液(0.1%升汞或2%次氯酸钠)(含有几滴活化剂Tween20或Tween 80)，使材料完全浸没在消毒液中，盖上盖，把玻璃瓶置入超净工作台灭菌一定时间。在灭菌期间须把玻璃瓶摇动2～3次。 4．消毒处理后，将瓶盖打开，将消毒液倒出，注入适量的无菌蒸馏水，再盖上盖，摇动数次，将水倒掉，重复3～4次。 （三）几种外植体的灭菌方法 3、花药的消毒 4、根及地下部器官的消毒 （一）无菌操作 1、接种室的消毒 2、工作人员要求 3、材料的切取 （二）外植体培养 2、定期检查和细胞学观察 污染的预防措施 （三）预防措施 第二节 实验室的设计与设备 准备室 试管苗的驯化 （三）、试管苗的移栽 常规移栽法 直接移栽法 嫁接移栽法 指选取生长良好的同一植物的实生苗或幼苗作砧木，用试管苗作接穗进行嫁接的方法。 （四）、提高试管苗移栽成活率的途径 试管苗的生理状况 植物生长调节物质 无机盐浓度 活性炭 环境因子 移栽过程中试管苗从无菌向有菌逐渐过渡 1．进行植物组织培养需要哪些设备？各有何作用? 2．植物组织培养主要包括哪些环节?各环节的主要工 作内容是什么? 3．培养基包括哪些基本成分?其作用是什么?如何配制? 4．如何对外植体、 培养基、培养器皿、接种器械进 行灭菌？ 5．离体培养的植物材料对光、温、湿度有何要求？ 如何调控？ 6. 何谓玻璃化？何谓褐化？如何克服？ 复 习 思 考 题 一、实验室设计 准备间、缓冲室、接种室、培养间 驯化室、温室 * 第一节 植物组织培养的操作方法概述 一、外植体的选择 二、外植体的灭菌 三、外植体的接种和培养 四、外植体的成苗途径 五、污染的原因及其预防措施 六、外植体的褐变及其防止措施 七、培养物的玻璃化现象及其防止措施 八、试管苗的驯化与移栽 外植体（Explants）：指植物离体培养的各种接种材料，包括植物体的各种器官、组织、细胞和原生质体。 一、 外植体的选择 外植体的选择依据 优良的种质 健壮的植株 大小适宜的外植体 适宜的发育时期 适宜的部位 适宜生理状态和发育年龄的器官 细胞培养材料的选择 （二） 外植体灭菌的一般步骤 二、外植体的灭菌 （一）常用灭菌剂的使用及其效果 （三）各种外植体的灭菌方法 （一）常用消毒剂 很好 很好 很好 很好 好 最好 好 较好 好 5~30 5~30 5~30 2~10 5~15 2~10 0.2~2 30~60 5~30 易 易 易 易 最易 较难 易 中 较难 9～10 2 饱和溶液 1～2 10～12 0.1～1 70～75 4～5（mg/L） 1 次氯酸钙 次氯酸钠 漂 白 粉 溴 水 过氧化氢 升 汞 酒 精 抗 菌 素 硝 酸 银 效果 消毒时间（分） 去除的难易 使用浓度（％） 消毒剂 自:曹孜义 1．预处理，先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，将准备使用的植物材料在流水中冲洗干净。经过预处理的植物材料，其表面仍有很多细菌和真菌。　 2．将植物组织块置于一个有丝盖的玻璃瓶中，注入75%的酒精溶液埋没材料，浸泡10S左右。倒出酒精，用无菌水冲洗一次。 1、茎尖、茎段及叶片等的消毒 消毒前要经自来水较长时间的冲洗。 消毒时要用70%的酒精浸泡数秒，无菌水冲洗2～3次，然后用2%～10%的次氯酸钠溶液浸泡10～25min，若材料有茸毛最好在消毒液中加入几滴吐温-80，或者用0.1％～0.2％升汞浸泡消毒5～10分钟消毒后，用无菌水冲洗3次后方可接种。 2、果实及种子的消毒 用自来水冲洗10～20分钟或更长，用纯酒精迅速漂洗一下。 果实用2%次氯酸钠溶液浸 10min后，用无菌水冲洗2～3次。 种子要先用10%次氯酸钠浸泡 20～30min甚至几小时。对难以消毒的还可用0.l%升汞或1%～2%溴水消毒5min。 胚或胚乳培养时，对种皮太硬的种子，可先去掉种皮，再用4%～10%的次氯酸钠溶液浸泡8～10min，经无菌水冲洗后，即可取出接种。 70％酒精擦洗花蕾，或浸泡数秒钟 饱和漂白粉上清液：浸泡10分钟；或次氯酸