第6章 氨基酸与核酸发酵.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * （2）改变核苷酸对细胞膜的渗透性 核苷或碱基容易透过细胞膜，而核苷酸难于透过细胞膜。 日本科学家发现，Mn2+对于产氨短杆菌核苷酸的膜透性起着关键作用， Mn2+限量的情况下，菌体产生膨胀异常现象，细胞膜允许IMP渗透到胞外，积累IMP。 Mn2+限量与生物素亚适量结果相同，但机制不同。 Mn2+亚适量：培养后期，细胞形态异常（伸长、膨胀、不规则） 生物素亚适量：为乙酰CoA羧化酶的辅基，影响脂肪酸生物合成，间接影响细胞膜磷脂合成，从而影响细胞膜透性。 2.培养条件 （1）因所用菌株为腺嘌呤缺陷型，所以添加适量腺嘌呤（加0.5%酵母膏或酵母水解液）。 （2）Mn2+亚适量 工业原料和工业用水含较多的Mn2+，难于控制Mn2+亚适量,有两条途径： a.筛选对Mn2+不敏感的突变株 b.加抗生素或表面活性剂以解除过量Mn2+的影响。 （3）添加较高浓度的磷盐。 （二）二步法（肌苷酸生产主要方法） 发酵法 肌苷 肌苷酸 原因： IMP对细胞膜的透性很差。 微生物中普遍存在使IMP脱磷酸化的酶类。 磷酸化 肌苷生产菌的选育 常用：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的腺嘌呤缺陷型。 原因： 该菌磷酸酯酶活性强，有利于将IMP脱磷酸化形成肌苷，分泌至胞外。 因此，对B. subtilis 进行菌种改良，可大量积累肌苷。 2.培养条件 （1）培养基： 碳源：淀粉水解糖或糖蜜 氮源：要充分（因肌苷含氮量高，20.9％） 无机盐：可溶性磷盐有抑制作用（胞外磷酸化） 生长因子：加适量含腺嘌呤的物质，如酵母膏。 腺嘌呤的最适浓度： 不影响菌体生长 使肌苷大量积累 （2）发酵条件 通气搅拌：供氧充足，促进肌苷生成，并可减少CO2对肌苷生成的抑制。 （3）肌苷的提取 先过阳离子交换柱，再过活性炭柱（吸附），结晶。 3.肌苷的磷酸化 （1）酶法： 酶：核苷磷酸化酶（三叶草假单胞菌） 磷酸的供体：对硝基苯磷酸 难点：除5 ? －磷酸化产物外，还有3 ? -、2 ? -位异构体，收率85％。 （2）化学法：用不同的磷酸化试剂。 4.肌苷酸的提取 离子交换法 除菌体 除对硝基酚 柱层析 （过滤、离心） 活性炭吸附 加乙醇沉淀 精制（结晶） 粗制品 肌苷酸 * * 全世界AA的年需求量10%的速度增长，年总产量120万吨以上，而其需求量达800万吨。作为食品添加剂占40%，饲料添加剂占40%，医药保健品占20%。年产值已接近600亿美元。 1999年国内氨基酸产值30亿元，2000年达40亿元。目前用于AA输液的18种AA原料药品种，14种已工业化，原料药生产厂家从1989年的8家发展到现在的40多家。AA生产企业有100多家，年产量3万吨左右。 * 1866年德国的Ritthausen博士利用硫酸水解小麦面筋，分离到一种酸性氨基酸，原料取材，命名为谷氨酸。1910年日本的味之素公司用水解法生产谷氨酸。1956年日本协和发酵公司分离到谷氨酸棒杆菌，1957年开始发酵法生产味精。我国1958年开始研究，1965年在上海天厨味精厂投产 生产氨基酸的大国为日本和德国。 日本的味之素、协和发酵及德国的德固沙是世界氨基酸生产的三巨头。它们能生产高品质的氨基酸,可直接用于输液制剂的生产。 日本在美国、法国等建立了合资的氨基酸生产厂家,生产氨基酸和天冬甜精等衍生物。 国内生产氨基酸的厂家主要是天津氨基酸公司,湖北八峰氨基酸公司,但目前无论生产规模及产品质量还难于与国外抗衡。 在80年代中后期,我国从日本的味之素、协和发酵以技贸合作的方式引进输液制剂的制造技术和仿造产品,1991年销售量为二千万瓶,1996年达六千万瓶,主要厂家有无锡华瑞,北京费森尤斯,昆明康普莱特,但生产原料都依赖进口。 2000年后,世界氨基酸产值已达45亿美元,占生物技术市场的7%,国内的氨基酸产值可达40亿元,占全国发酵产业总产值的12%。 * * * * 提问：通过该生物合成途径，我们最希望的理想途径是什么？（封闭TCA环和封闭DCA环，有葡萄糖酵解产生的丙酮酸直接合成乙酰辅酶A和草酰乙酸合成柠檬酸到异柠檬酸到α-酮戊二酸到谷氨酸。 * * * * * * * * * * * * * * * * ⑵温度及