第十一章程序性细胞死亡与细胞衰老.pptVIP

(cellular aging或cell senescence) ● Hayflick界限(Hayflick Limitation） ● 细胞在体内条件下的衰老 ● 衰老细胞结构的变化 ● 细胞衰老的分子机理 ●细胞核的变化 ●内质网的变化: 衰老动物内质网成分弥散性地分散于核周胞质中，粗面内质网的总量似乎是减少了。 ●线粒体的变化: 通常，细胞中线粒体的数量随龄减少，而其体积则随龄增大。 ●致密体的生成 ●膜系统的变化 ◆体外培养的二倍体细胞，细胞核随着细胞分裂次数的增加不断增大。 ◆细胞核的核膜内折（invagination）、染色质固缩化。 ◆衰老的细胞，其膜流动性降低、韧性减小。 ◆衰老细胞间间隙连接?。 细胞膜内（P面）颗粒的分布也发生变化?。 ● 氧化性损伤学说：代谢过程中产生的活性氧基团或分子（ROS---O2-， OH-， H2O2），引发的氧化性损伤的积累，最终导致衰老。 ● 端粒与衰老：发现端粒长度确实与衰老有着密切的关系，提出细胞衰老的 “有丝分裂钟”学说（Harley，1990）。 ● rDNA与衰老: 酵母染色体外rDNA 环（ERC）的积累，导致细胞衰老。 ● 沉默信息调节蛋白复合物（Sir complex）与衰老：Sir complex 存在于异染色质区，其作用在于阻断所在位点DNA转录。 ● SGS1基因和WRN基因与衰老：SGS1基因和WRN基因同源,编码解旋酶；酵母sgs1突变体寿命明显短于野生型（平均9.5代:24.5代）；wrn突变引发早老症。 ● 发育程序与衰老: ● 线粒体DNA与衰老: mtDNA突变积累与细胞衰老有关。 ● 细胞凋亡的概念及其生物学意义 ● 细胞凋亡的形态学和生物化学特征 ● 细胞凋亡的分子调控机理 ● 细胞凋亡与坏死(necrosis) ● 细胞凋亡的形态学特征 ● 细胞凋亡的生化特征 ● 诱导细胞凋亡的因子 ● 细胞凋亡的检测 细胞凋亡过程中，细胞质膜反折，包裹断裂的染色质片段或细胞器，然后逐渐分离，形成众多的凋亡小体（apoptotic bodies），凋亡小体则为邻近的细胞所吞噬。整个过程中，细胞质膜的整合性保持良好，死亡细胞的内容物不会逸散到胞外环境中去，因而不引发炎症反应。 包括射线（紫外线，? 射线等），较温和的温度刺激（如热激，冷激）等。 研究发现，当Caspase8活化后，它一方面作用于Procaspase3，另一方面使Bid裂解成2个片段，其中含BH3结构域的C端片段被运送到线粒体，与Bcl-2/Bax的BH3结构域结合，导致CytC释放。 1、正常细胞；2、细胞凋亡的起始，染色质固缩、分离并沿核膜分布，细胞质亦发生固缩；3、凋亡中的细胞，细胞质膜反折，包围细胞碎片，如染色质片断和细胞器，形成芽状突起，以后逐渐分隔，形成凋亡小体；4、凋亡小体被邻近细胞吞噬；5、坏死的早期阶段，染色体形成串状片段，细胞器膨胀，线粒体基质呈絮状；6、坏死的最后阶段，细胞膜破裂，细胞解体内容物散逸。 细胞凋亡与坏死的比较 3、细胞凋亡的生化特征 ◆ 细胞凋亡的主要特征是DNA发生核小体间的断裂，琼脂糖凝胶电泳时，形成大小为180～200bp特征性的DNA ladders。 ◆ 凋亡细胞组织转谷氨酰胺酶tTG（tissue Transglutaminase）积累并达到较高水平。 1．细胞色素c诱导0 h 2．细胞色素c诱导1 h 3．细胞色素c诱导2 h 4．细胞色素c诱导3 h 5．细胞色素c诱导4 h 6．阴性对照 7．Marker 细胞色素c诱导的凋亡细胞DNA电泳图 4、诱导细胞凋亡的因子 ◆物理性因子 ◆化学及生物因子 包括活性氧基团和分子，DNA和蛋白质合成的抑制剂，激素，细胞生长因子，肿瘤坏死因子?（TNF?），抗Fas/Apo-1/CD95抗体等。 5、细胞凋亡的检测 ◆ 形态学观测 染色法、透射和扫描电镜观察。 ◆ DNA电泳 DNA片段就呈现出梯状条带。 ◆ TUNEL测定 （terminal deoxynucleotidyl transferase（TdT）-mediated dUTP nick end labeling，末端脱氧核苷酸移换酶介导的dUTP缺口末端标记测定法）。 对DNA分子中3’-OH断裂缺口进行原位标记。凋亡细胞的核DNA中产生的3’-OH末端，可藉助一种可观测的标记物，如荧光素进行原位标记，并用荧光显微镜进行观察。 根据凋亡细胞DNA断裂和丢失，采用碘化丙啶使DNA产生激发荧光，用流式细胞仪检出凋亡的亚二倍体细胞，同时又能观察细